雷公藤内酯醇对EAE小鼠脊髓TNF-α\IL-12 和TGF-β1表达的影响(2)

http://www.100md.com 2010年5月25日 任晓荣 樊红翠 尉杰忠 纪 宁 梁丽云 马存根

第1页

    参见附件(2103KB，3页)。

     1.5 观察指标

    造模38~40 d后,10%水合氯醛按0.1 ml/20 mg腹腔注射麻醉后,小鼠左心室灌注磷酸盐缓冲液至肝脏变白,再使用4%多聚甲醛至尾部僵直,解剖取脊髓(包括颈膨大,腰膨大)。制作石蜡切片。

    1.5.1 HE染色及LFB 髓鞘染色,光镜观察组织形态学改变。

    1.5.2用免疫组织化学法观察TGF-β1、TNF-α和IL-12的表达,并应用医学图像分析系统进行分析。

    1.6 统计学方法

    数据均采用均数±标准差(x±s)来表示,采用SPSS 13.0软件对所得数据进行分析处理。组间临床症状评分比较采用秩和检验,其余组间比较采用单因素方差分析,率的比较采用χ2检验,P<0.05为差异有统计学意义。

    2结果

    2.1 脊髓形态学

    HE染色发现EAE组小鼠脊髓炎性浸润呈典型的“袖套样”改变,浸润细胞以淋巴细胞和中性粒细胞为主,尤其腰膨大炎性浸润比较明显,其余脊髓节段浸润相对较轻,炎性浸润主要分布在脊髓前角白质、灰白质交界区及正中裂血管周围,并且炎性浸润部位及程度与临床症状密切相关。Tri治疗组小鼠脊髓实质中炎性细胞浸润明显减轻。佐剂组小鼠脊髓未见明显异常改变。

    脊髓LFB髓鞘染色EAE组可见脊髓白质疏松,髓鞘不连续,有大小不等的片状脱髓鞘区。炎性细胞浸润弥散,灰白质受累,尤以灰白质交界区最重,前索及侧索内均有片状脱髓鞘区。Tri治疗组脊髓髓鞘脱失较轻。佐剂组小鼠脊髓未见明显改变。

    2.2 TGF-β1、 TNF-α和IL-12免疫组化检测结果

    TNF-α免疫组化染色表现为由血管渗出的淋巴细胞周围有不同程度着色。TGF-β1、和IL-12在血管周围、灰白质交界区表达明显。经图像分析系统测定并比较各组着色区染色程度,各组细胞因子计算平均积分光密度值,用SPSS 13.0统计软件对其表达,进行相关统计分析,数据呈正态分布,方差齐。结果见表1。

    3讨论

    EAE主要是由Th1细胞直接介导的以中枢神经系统病变为主的自身免疫性疾病,被公认为MS的理想动物模型。本实验形态学观察显示:脊髓炎性浸润呈典型的“袖套样”改变,浸润细胞以淋巴细胞和中性粒细胞为主,尤其腰膨大炎性浸润比较明显,炎性浸润主要分布在脊髓前角白质、灰白质交界区及正中裂血管周围,髓鞘破坏后表现为片状白质脱髓鞘,髓鞘结构松解或融合,以血管周围明显,说明髓鞘是炎症和免疫反应的靶位。这些与国外报道的MOG35-55 EAE模型相符[3],并且符合MS脱髓鞘为主的病理改变。

    细胞因子是一组调节免疫应答的小分子多肽类因子,在免疫系统的调控中起到重要作用,在EAE的发病中不同CK作用不同。TNF-α与IL-12均属于促炎性细胞因子,TNF-α主要与Th1细胞介导的炎症反应有关,可诱导多种黏附分子、趋化因子、细胞因子(如IL-1,IL-6)活化。在急性期主要为浸润的炎性细胞、小胶质细胞呈现TNF-α免疫反应阳性,而恢复期则主要在星形胶质细胞中表达。有研究表明,血清中TNF-α浓度增高程度与EAE临床症状严重程度呈正相关[4]。在Lewis鼠模型中将TNF-α或IFN-γ注入大脑半球可加重EAE[5]。IL-12在Th1细胞分化上起重要作用,而且可诱导Th1细胞、NK产生IFN-γ[6]。Vandenbroeck K等[7]和Sergio D等[8]发现抑制IL-12可控制Th1细胞分化,并减轻EAE的病理变化。本实验研究显示,佐剂组脊髓TNF-α及IL-12的含量均较低,而EAE组两者的表达均明显升高(P<0.01或P<0.05),说明TNF-α及IL-12在EAE形成和发展过程中过度表达,是促炎因子和Th1占据优势的表现。可以推测EAE的病变与Th1细胞的免疫功能亢进及其分泌的促炎因子增多有关。

    调节性T细胞(Treg)是具有免疫调节功能的T细胞群体,它在免疫耐受中起关键作用,能限制过度的免疫反应引起的组织损伤[9]。Viglietta V等[10]和Haas J等[11]分别研究证实MS患者Treg本身具有功能障碍。TGF-β1是由Treg所分泌,它可抑制T、B细胞和巨噬细胞的活化;下调黏附分子并抑制白细胞和内皮细胞的黏附,保护血脑屏障[11];和细胞毒性淋巴细胞抗原(CTLA-4)共同中止免疫应答;和其他免疫抑制分子一起维持免疫耐受状态[11]。本实验结果显示:与佐剂组相比,EAE组TGF-β1的含量明显降低(P<0.05),说明在EAE形成和发展过程中,TGF-β1有异常降低的现象,是Treg免疫功能低下的表现。

    雷公藤内酯醇(Tri)是中药雷公藤的有效成分,具有抗感染、抗肿瘤、免疫抑制等作用。既往对Tri的研究证实了它对CD4+和CD8+T淋巴细胞均有抑制作用,可显著降低EAE大鼠的病情,促进T淋巴细胞的凋亡,减轻炎性细胞在中枢神经系统(CNS)的浸润程度;证实了Tri可通过下调表达ICAM-1恢复内皮细胞正常的细胞膜和细胞间结构,起到对血脑屏障的保护作用。本实验研究显示,经Tri治疗后, TNF-α及IL-12的含量明显降低(P<0.05),TGF-β1的含量,明显升高(P<0.05)。说明Tri可通过下调促炎性细胞因子的含量,同时,上调内源性TGF-β1的含量,从而维持免疫耐受状态,恢复机体免疫稳定状态进而抑制EAE的进展。

    [参考文献]

    [1]丁晓凌,周国雄.雷公藤内酯醇诱导肿瘤细胞凋亡的机制[J].国际肿瘤学杂志,2006,33(4):259-261.

    [2]Mendel I, Kerlero N, Rosbo D, et al. A myelin oligodendrocyte glycoprotein peptide induces typical chronic experimental autoimmune encephalomyelitis in H-2b mice: fine specificity and T cell receptor V beta expression of encephalitogenic T cells[J] ......

    http://www.100md.com/html/paper/1674-4721/2010/15/03-1.htm

您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2103KB，3页)。