燕窝对ConA刺激下大鼠淋巴细胞增殖的增效作用
伪品,悬液,1材料与方法,1实验材料,2实验动物,3主要试剂,4主要仪器,5试剂配制,6方法,2结果,1MTT比色法测定大鼠肠系膜淋巴结细胞的生长曲线,2ConA浓度对淋巴细胞转化的影响,3燕窝浓度对淋巴细胞转化
侯 雁,冼小敏,林洁茹,赖小平,陈建南(广州中医药大学中药学院,广东广州 510405)
燕窝(Ediblebird'snest,EBN)是指雨燕科(Apodidae)若干种金丝燕单独使用唾液分泌物或黏合羽毛、植被所筑的巢窝。据曹炳章的《燕窝考》中记载,燕窝能“养胃液,滋肺阴,生津益血,润燥泽枯,壮阳益气,和中开胃,填精补髓,止咳化痰”,现代多认为燕窝具有免疫促进作用[1]。为此,本文探讨了不同品种燕窝及其伪品对ConA刺激大鼠淋巴细胞转化的增效作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
原燕窝(白燕窝半加工品)、白燕窝、黄燕窝、血燕窝、即食燕窝均由新加坡锦兴公司提供,经本实验室采用分子生物学技术鉴定为爪哇金丝燕产燕窝[2];怀集燕窝来自广东省怀集县,同法鉴定为小白腰雨燕窝;草燕窝产自菲律宾,由新加坡菲利公司提供。市售燕窝经mtDNA序列测定[2]以及SDS-PAGE电泳图谱鉴定为伪品;而燕窝的常见伪品猪皮、明胶则购自传统市场。
1.2 实验动物
SPF 级 SD 大鼠 5只,4~6周龄,雄性,体重(190±10)g,由广东省实验动物中心提供。
1.3 主要试剂
RPMI-1640干粉,广州合达生物有限公司;伴刀豆蛋白A(ConA),Sigma公司产品;胎牛血清,上海微科生化试剂公司;Bradford蛋白定量试剂盒,Tiangen 17803;胃蛋白酶、胰蛋白酶,AMRECO公司。
1.4 主要仪器
Sartorius分析天平 BS110S;Eppendrof台式冷冻离心机5810R;全自动酶联免疫检测仪GENios;恒温水浴锅HH-2,江苏金坛市宏华仪器厂。
1.5 试剂配制
1.5.1 RPMI-1640培养基
10 g RPMI-1640 干粉,0.11 g Na2CO3,5.925 g Hepes,用双蒸水定容至1 000 ml,过滤灭菌,-40℃保存,避免反复冻融。
1.5.2 RPMI-1640完全培养液
在RPMI-1640培养液中加入胎牛血清、青霉素、链霉素和β-巯基乙醇,使其终浓度分别为10%、100 U/ml、5 mM。
1.5.3 2×人工胃液配方
NaCl 4.0 g,胃蛋白酶 6.4 g,浓盐酸 14 ml,双蒸水定容于1 000 ml。 pH 约为 1.2[3]。
1.5.4 2×人工肠液配方 ......
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