P16和Ki-67在外阴上皮内瘤变中的表达及意义(2)
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2.2 Ki-67的标记结果
见表2。
正常组90%(27/30)的病例上皮Ki-67无着色，7%的病例上皮Ki-67阳性着色且阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3。3%(1/30)的病例上皮Ki-67阳性着色且阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3。3%(1/30)的病例上皮Ki-67阳性细胞分布于鳞状上皮的下1/3以上。
低级别VIN组，约有38%(6/16)的病例Ki-67阳性细胞大于25%，且阳性细胞分布于上皮下1/3以上(图3)。所有高级别VIN Ki-67均呈阳性，其中96%(27/28)的病例阳性细胞数大于25%，且分布到上皮中或上1/3(图4)。Ki-67的阳性表达率在高级别VIN与正常组，高级别VIN与低级别组之间差异均具有统计学意义(P<0.01)。
注：P16阳性表达定义为中1/3和(或)上1/3上皮细胞的弥漫的阳性着色。Ki-67阳性表达定义为下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞核阳性着色
通过对比高级别VIN与非高级别VIN的P16，Ki-67标记结果发现，若将P16阳性表达界定为中和(或)上1/3外阴上皮细胞弥漫阳性着色，Ki-67阳性界定为下1/3外阴上皮以上大于或等于25%的上皮细胞核阳性着色，P16和Ki-67在高级别VIN与非高级别VIN之间的表达存在显著性的差异(P<0.01)。作为鉴别高级别VIN的标志物P16的敏感性、特异性分别是93%、94%，Ki-67的敏感性、特异性分别是93%、85%。
3讨论
研究证实外阴上皮内瘤变的病因机制与人类乳头状瘤样病毒(HPV)的感染有关[6]。HPV是一种无包膜的环状闭合双链DNA病毒，在鳞状上皮细胞层进行病毒复制，其所含有的E6、E7基因可整合入宿主的基因组内，E6通过泛素途径降解p53，E7引起Rb蛋白的功能失调。接着导致上皮细胞的细胞周期发生紊乱，引起包括Ki-67、P16蛋白在内的原本正常的细胞增殖蛋白出现异常表达[7]。
P16是一种抑癌基因[8]。当HPV感染的细胞PRb失活，使PRb负反馈调节细胞内P16水平的作用消失，P16表达增加。细胞增殖活性可通过检测Ki-67核抗原的表达水平进行评估，高危型HPV感染可导致上皮细胞增殖活跃。
本组实验数据结果显示，高级别VIN、低级别VIN和良性上皮中Ki-67的阳性率分别为100%、75%和10%；P16的阳性率分别是100%、44%和7%。可见P16和Ki-67在不同级别VIN中的显示均有较大的差异。另外，测试结果还显示高级别VIN上皮P16阳性细胞百分率高，主要呈弥漫阳性着色，阳性细胞分布于下1/3上皮以上，低级别VIN中P16阳性细胞少，主要呈灶性片状阳性，阳性细胞位于上皮的下1/3；Ki-67在高级别VIN中的阳性细胞分布于上皮中或上1/3，而低级别VIN病例Ki-67阳性细胞分布于上皮下1/3。采用P16和Ki-67标记外阴组织，可有效的鉴别正常组织、低级别上皮内瘤变与高级别上皮内瘤变[9]。
尽管这两种标志物均可有效的检出高级别VIN，但每种标志物的应用都有其局限性[10]。作为高级别VIN的标志物，P16的特异性为93%，比Ki-67高(87%)；敏感性为93%，比Ki-67稍低(96%)。本实验收集的30例正常患者中，有3例Ki-67呈阳性着色，其中2例阳性数小于25%，且细胞分布于上皮下1/3，根据高级别Ki-67阳性判断标准，这2例阳性患者应判断为阴性。余下的1例阳性数大于25%，且分布于上皮下1/3以上，且发现其真皮表面出较重的炎症反应，其原因可能是组织进行自主修复进而导致细胞增生活跃。因此，仅用Ki-67标记，并不能完全区别反应增生与上皮内瘤变。本组患者中，P16染色虽有3例表现为阳性着色，但阳性细胞均分布在上皮下1/3，根据P16阳性判断标准，此类病例判断为阴性着色，可见若Ki-67联合P16进行标记，可降低阳性的错判率，提高判断的准确性。我们在高级别VIN的判断标准中加入中1/3或上1/3上皮细胞的弥漫的阳性着色视为P16阳性，下1/3以上的上皮细胞大于或等于25%的细胞胞核阳性着色视为Ki-67阳性，提高了P16、Ki-67作为鉴别高级别VIN的特异性[11]。
对于VIN的常规病理组织学诊断，由于缺乏绝对的诊断标准，受主观因素影响较大，导致病理形态学诊断的可重复性相对较差。同时受送检标本上皮完整性，组织局限性等因素影响，出现VIN病理诊断时困难。而此类疾病无论是诊断不足或过诊断终导致疾病延迟治疗或过治疗。而P16，Ki-67检测为诊断提供了有效的客观参考指标，有助于提高诊断的准确性[12]。
本研究结果显示P16和Ki-67在外阴上皮正常组织、低级别上皮内瘤变和高级别上皮内瘤变之间的阳性表达率具有显著性差异，可敏感的鉴别出高级别VIN。采用P16和Ki-67二者联合标记，更能有效地降低假阳性病例的干扰，提高VIN诊断的特异性。
[参考文献]
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[3]史健,郑军生,尹方,等.宫颈上皮内瘤变P16、P53、Ki-67的表达与高危型HPV感染及其临床意义[J].南方医科大学学报,2007,27(1):515-517.
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[5]Stanley J.Robboy(主编),回允中(主译).女性生殖道开关曲面理学[M].北京:北京大学医学出版社,2005:41.
[6]Gross G, Hagedorn M,Ikenberg H,et al ......
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