胡桃醌体外抗胰腺癌细胞机制的初步研究(1)
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[摘要] 目的：探讨胡桃醌体外抗胰腺癌细胞的机制。方法：采用MTT法检测胡桃醌对BXPC-3细胞的生长抑制作用，流式细胞仪分析胡桃醌对BXPC-3细胞周期的影响。结果：MTT法试验结果显示，胡桃醌对体外培养的人胰腺癌BXPC-3细胞具有明显的生长抑制作用, 24、48 h的IC50值为1.64×10-5、5.8×10-5 mol/L。同时胡桃醌能随着浓度的增加，时间的延长，诱导BXPC-3细胞周期停滞于G2期和S期，呈G2期和S期阻滞作用。结论：胡桃醌对胰腺癌BXPC-3细胞有明显的生长抑制作用，并能阻止其周期，诱导BXPC-3细胞凋亡。
[关键词] 胡桃醌；BXPC-3细胞；细胞周期；细胞凋亡
[中图分类号] R736.7 [文献标识码]A[文章编号]1674-4721(2011)04(a)-022-02
Study of juglone on the mechanism of pancreatic cancer cells in vitro
CAO Jun1, LIU Jiansheng 2*
1.Shanxi Medical University, ShanxiProvince, Taiyuan030001, China; 2.Department of General Surgery, the First Hospital of Shanxi Medical University, ShanxiProvince,Taiyuan030001, China
[Abstract] Objective: To investigate juglone against pancreatic cancer cells in vitro mechanism. Methods: Juglone assayon BXPC-3 cell growth inhibition by MTT, analyzed juglone on BXPC-3 cell cycle by flow cytometry. Results: MTT assay shew that juglone inhibited the growth of vitro BXPC-3 human pancreatic cancer cells significantly. The IC50 was respectively 1.64×10-5, 5.8×10-5 mol/L after treatment for 24, 48 h by juglone. As the concentration and time of juglone could increase, induction of BXPC-3 cell cycle arrest in G2 phase and S phase. Conclusion: Juglone significantly inhibited the growth of BXPC-3 cells, and prevent cell cycle and induction apoptosis.
[Key words] Juglone; BXPC-3 cell; Cell cycle; Apoptosis
胰腺癌是消化系统最常见的恶性肿瘤之一，是世界上第4位致死性的肿瘤，是一种主要来源于胰腺导管上皮的恶性肿瘤，国内外报道其发病率有明显增高的趋势。胡桃醌(juglone，nuein)又名5-羟基-1，4-奈醌；5-羟基-1，4-奈二酮。是从胡桃揪新鲜根皮、枝皮、青果皮中分离出来的羟基奈醌类化合物，是胡桃揪中主要的毒性物质。胡桃揪皮为收敛药，对细菌性痢疾，骨结核等[1]有一定疗效。近年有研究表明，胡桃醌可有抗HIV病毒、衣原体、真菌、降血糖等生物活性[2-5]，而且具有抗肿瘤作用，其对肝癌、肺癌、黑色素瘤等多种肿瘤细胞株和小鼠自发性胃癌[6]有抑制作用，越来越被人们所重视。本实验旨在细胞实验的基础上，研究胡桃醌对胰腺癌细胞的体外抑制及细胞凋亡作用。
1 材料与方法
1.1 实验材料
①人胰腺癌BXPC-3细胞株：购于博士德公司。使用第3~5代对数生长期细胞实验。②胡桃醌：购自sigma。称取胡桃醌3.5 mg，溶于DMSO中，用PBS液稀释成20 mmol/L的胡桃醌母液，-20℃保存备用。
1.2 MTT比色法检测BXPC-3细胞增殖
取对数生长期细胞，制备成BXPC-3单细胞悬液，细胞浓度为1×105/ml，接种于96孔板内，每孔细胞数为3×103个，于37℃，5%CO2条件下培养24 h后，加入胡桃醌，使其终浓度为0.0、12.5、25.0、50.0 μmol/ml，均设6个复孔，接种2个96孔板。分别培养24、48 h后MTT检测570 nm下各孔的光密度值OD，以溶剂对照组处理的肿瘤细胞为对照组。计算各浓度药物对细胞增殖的抑制率：细胞抑制率=(对照组平均OD值-加药组平均OD值)/对照组平均OD值×100%。
1.3 流式细胞仪检测细胞周期变化
选用BXPC-3单细胞悬液，并加入胡桃醌后使浓度分别为0.0、12.5、25.0、50.0、100.0 μmol/ml，培养24、48 h后碘化丙啶染色，使用流式细胞仪检测，每份标本1×106个细胞，应用多参数细胞周期分析软件处理，对标本进行细胞周期分析。
1.4 统计学分析
应用软件SPSS 13.0分析。MTT结果以x±s表示。流式细胞仪检测其对细胞周期的影响。
2结果
2.1 胡桃醌对BXPC-3细胞的生长抑制作用
实验表明，胡桃醌在体外对BXPC-3细胞有显著的抑制作用 ......
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