YKL-40与肿瘤相关巨噬细胞在非小细胞肺癌中的表达及预后分析(2)
1.3 免疫组化染色主要试剂:YKL-40兔抗人多克隆抗体浓缩液(1∶200),购自北京博奥森生物技术有限公司;CD68抗体(标记TAM):鼠抗人单克隆抗体(工作液,即用型),购自福建迈新生物公司,-4℃保存;通用型两步法试剂盒(SP)购自北京博奥森生物技术有限公司;主要仪器为,光学显微镜:Nikon YS100型;切片机:LEICA RM2145型;电热恒温水浴槽:11-2R型,上海医疗器械五厂;免疫组化孵育盒:福州迈新公司;免疫组化抗原修复盒:福州迈新公司;医用微波炉;电热恒温培养箱(上海市医疗器械一厂)。方法:采用卵白素-生物素-辣根过氧化物酶复合物(ABC)法[2] 。
1.4 结果判定
阳性判定标准:用试剂公司提供的表达阳性的切片作为阳性对照。以PBS代替一抗作阴性对照。每张经免疫组化染色之后的切片,均在病变区随机选择高倍视野(×400),每个视野计数100个细胞,至少5个随机视野,取其平均值。按阳性细胞占计数细胞的比例分为4个等级:未见阳性细胞为(-);阳性细胞小于25%为(+);25%~50%为(++);大于50%为(+++)[3]。
1.5 随访
术后随访率为94.74%。时间自从术后出院之日开始计算,以月为单位,观察的终止日期为2008年2月,在观察期间死于其他疾病或因某不可控因素而失去联系者视为“删失(sensored)数据” ......
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