气相色谱-质谱法测定矾冰纳米乳中龙脑的含量
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[摘要] 目的：建立矾冰纳米乳中冰片含量的测定方法。方法：采用气相色谱-质谱法测定矾冰纳米乳中冰片的含量，色谱柱为Rtx-5 ms(0.25 mm×30 m，0.25 μm)；柱温从80℃开始，以10℃/min升至120℃，并保持4 min，再以20℃/min升至140℃；汽化温度为250℃；载气为高纯度氦气。结果：色谱峰峰面积与进样量呈良好线性关系，平均回收率达到100.88%，24 h内稳定。结论：所建立的含量测定方法简便、专属性强、重复性好，可用于该制剂的质量控制。
[关键词] 矾冰纳米乳；气相色谱-质谱法；含量测定；龙脑
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721(2011)04(c)-053-02
矾冰液是湖南中医药大学附一院院内制剂，具有清热解毒、消肿止痛、生肌敛疮的作用，30多年来一直用于治疗Ⅰ度、Ⅱ度烧(烫)伤[1-2]、变态反应性皮肤病[3]、外科创面感染[4]等疾病，疗效确切。但矾冰液为混悬剂，属于热力学不稳定的粗分散体系，其中所含冰片因水溶性低极易结晶析出，难于分散均匀，生物利用度较低。为克服矾冰液的不足，提高冰片的溶解度和分散度，将矾冰液改制成了分散均匀性好且热力学更稳定的纳米乳制剂。为控制该纳米乳制剂的质量，保证其临床疗效，采用GC-MS法对其所含冰片中的龙脑进行了含量测定的研究。
1 实验材料
1.1 仪器
气相-质谱色谱仪(日本岛津)，工作站(GC-MS QP2010 solution 2.53)。
1.2 试药
矾冰纳米乳(自制)；龙脑对照品(批号1100881-200706，纯度为99.2%)，由中国药品生物制品检定所提供；水杨酸甲酯、无水乙醇均为分析纯。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Rtx-5 ms(0.25 mm×30 m，0.25 μm)；柱温从80℃开始，以10℃/min升至120℃，并保持4 min，再以20℃/min升至140℃；汽化温度为250℃；载气为高纯度氦气；流速为1 ml/min。质谱条件：EI离子源，电子能量为70 eV，离子源温度为200℃，接口温度为250℃；进样量为1 μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取龙脑对照品20.3 mg，置于5.0 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(4.06 mg/ml)。
2.3 内标溶液的制备
精密称取水杨酸甲酯0.410 1 g，置于100 ml容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，即得(4.101 mg/ml)。
2.4 供试品溶液的制备
精密量取矾冰纳米乳2.0 ml，置于10 ml容量瓶中，精密加入1 ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，0.45 μm微孔滤膜滤过，取续滤液，即得。
2.5 阴性对照液的制备
精密量取缺冰片的空白纳米乳2.0 ml，按照供试品溶液的制备方法制备，即得。
2.6 干扰试验
照上述色谱条件，分别精密吸取供试品溶液、对照品溶液、阴性对照溶液注入气质联用仪，记录色谱图。结果表明，供试品色谱中在与对照品色谱相应的位置上有相同的色谱峰，而阴性对照液未见干扰(图1)。
2.7 标准曲线的绘制
分别精密量取对照品液0.05、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50 ml置于2 ml容量瓶中，精密加入1 ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，备用。精密吸取上述不同浓度的对照品溶液各1 μl，注入气质联用仪，测得各浓度对应的峰面积积分值。以龙脑峰面积与内标峰面积的比值对浓度进行线性回归，回归方程为：Y=3.198 8X-0.002 3，R2=0.999 9，表明龙脑在0.101 5～1.015 0 mg/ml范围内与峰面积比值具有良好的线性关系。
2.8 精密度实验
精密量取龙脑对照品溶液0.3 ml置于2 ml容量瓶中，精密加入0.2 ml内标溶液，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀，按上述色谱条件重复进样6次，测定峰面积积分值，结果龙脑与内标峰面积比值的RSD为1.76%。
2.9 稳定性实验
取同一矾冰纳米乳供试液，按上述色谱条件分别在0、2、4、6、12、24 h进样，测定龙脑与内标的峰面积积分值，结果龙脑与内标峰面积比值的RSD为0.76%，表明龙脑在24 h 内基本稳定。
2.10 重复性实验
取同一批号的矾冰纳米乳，按供试品溶液制备方法制备5份供试液，同上测定，测得平均含量为1.474 mg/ml，RSD为1.84%，表明测定方法重复性良好。
2.11 加样回收实验
精密量取已知含量的矾冰纳米乳样品1 ml，共5份，置10 ml量瓶中，精密加入龙脑对照品溶(3.84 mg/ml)0.4 ml(即1.536 mg)，然后按上述方法制备供试品溶液，测定含量，并计算回收率，结果见表1。
2.12 样品的测定
取不同批次矾冰纳米乳样品，按上述方法制备供试品溶液，并进行测定，结果三批样品龙脑的含量分别为1.474%、1.468%、1.498%。
3 讨论
冰片中的主要成分是龙脑和异龙脑，一般来说，以龙脑的含量作为冰片质量控制的主要指标，因为冰片(龙脑)具有一定的挥发性，因此常选用GC法测定冰片的含量。文献报道中也常见采用GC法测定制剂中冰片的含量[5]。此外，GC-MS法具有GC的高分辨率和MS的高灵敏度，并且专属性强，检测限低，通过数据库可以得到相关的结构信息。也有文献报道采用GC-MS法测定冰片的含量[6-7]。本文采用GC-MS联用法测定矾冰纳米乳中冰片的含量，方法简便可行，重复性好，故可用于该制剂的质量控制。
[参考文献]
[1]刘丽芳,周青,刘鸿宾.矾冰液湿敷治疗浅Ⅱ度烧伤120例临床观察[J].中国中医急症,2002,11(6):448.
[2]黄坚,程宇星,熊凤珍,等 ......
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