淋巴细胞亚群检测在儿童特发性血小板减少性紫癜中的临床意义
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[摘要] 目的：探讨淋巴细胞亚群与儿童特发性血小板减少性紫癜(ITP)的关系及临床意义。方法：采用流式细胞术分别检测儿童ITP患者和对照者外周血Th和Tc细胞亚群、B细胞、NK细胞及Treg细胞变化。结果：持续性ITP组和慢性ITP组与对照组比较，CD8+T淋巴细胞、CD19+B细胞升高，CD3+、CD4+T细胞，CD4+/CD8+T细胞降低，CD4+CD25+/CD4+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+细胞/CD4+T细胞降低，新诊断ITP组CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞低于与对照组；与持续性ITP组和慢性ITP组比，CD19+B细胞降低，CD3+、CD4+T细胞，CD4+/CD8+T细胞，CD4+CD25+/CD4+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+/CD4+T细胞均升高，对照组CD16+56+NK细胞高于其他三组，差异均有统计学意义(P<0.05)。结论：T淋巴细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞比例失衡与儿童持续性和慢性ITP的发病有关，外周血淋巴细胞亚群变化对儿童ITP的临床诊断及预后判断有一定价值。
[关键词] 特发性血小板减少性紫癜；T淋巴细胞亚群；B淋巴细胞；NK细胞
[中图分类号] R558+.2 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721(2011)04(c)-083-02
特发性血小板减少性紫癜(idiopathic thrombocytopenic purpura，ITP)发病机制尚不完全明了，目前认为可能与机体免疫功能失调、血小板相关抗体产生、免疫细胞介导的血小板凋亡等有关[1-2]，但确切机制仍未完全明确。本文就淋巴细胞亚群与ITP发生的关系及其临床意义进行了分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2010年3月～2011年2月在本院血液科住院的ITP患者60例，男25例，女35例；年龄1～14岁，平均(6.1±2.3)岁，诊断均符合文献标准[3]。将其分为：新诊断ITP组(诊断后3个月以内血小板减少)35例，持续性组(诊断后3～12个月血小板持续减少)15例，慢性ITP组(血小板减少持续超过12个月)10例，所有患儿在采集标本1周内均未接受糖皮质激素等任何免疫相关治疗。对照组为30例为健康体检者，男18例，女12例；年龄1～11岁，平均(5.8±6.1)岁。两组年龄、性别差异无统计学意义，具有可比性。
1.2 方法
本实验各单抗及相应的同型对照及试剂盒均为由美国BD公司提供，流式细胞仪为美国Beckman-Coulter公司产品。Th/Ts淋巴细胞亚群、B淋巴细胞及NK细胞为抽取晨起空腹外周血2 ml，用流式细胞仪进行淋巴细胞亚群测定，分析计算CD19+、CD16+CD56+细胞百分率及CD4+/CD8+细胞比值。调节性T细胞检测为采集外周静脉血5 ml，送检并计算CD4+CD25+T细胞、CD4+CD25+Foxp3+T细胞占CD4+T细胞的比例。
1.3 统计学方法
采用SPSS 13.0软件包进行处理，计量资料以表示，数据资料呈正态分布，组间比较采用t检验，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 Th/Ts细胞亚群、B淋巴细胞和NK细胞检测结果
见表1。
2.2 CD4+CD25+T细胞和CD4+CD25+Foxp3+T细检测结果
见表2。
3 讨论
ITP为一种自身免疫性疾病，其中急性ITP为急性、自限过程，免疫状态好，随病原菌清除而恢复，不需要治疗，可自行恢复；慢性ITP为慢性病程，存在免疫失调和异常，细胞因子产生增强、淋巴细胞活性增加和特殊的自身抗体产生，需免疫治疗[4]。Cines DB等[5]认为，尽管B细胞产生针对血小板的自身抗体是ITP发病的直接原因，但T细胞异常导致B细胞激活可能是ITP真正的发病机制。
T淋巴细胞在免疫反应中起重要作用，是细胞免疫和体液免疫的重要环节，按免疫应答中的功能不同，可将T细胞分成辅助性T细胞(Th)和抑制性T细胞(TS)。最新的研究表明，辅助性T细胞(Th)和抑制性T细胞(TS)中不是所有的CD4+CD25+T细胞均具有抑制自身免疫的功能，部分CD4+CD25+T细胞并不具有调节性T细胞的功能。CD4+CD25+T细胞发挥抑制自身免疫的功能需要达叉头/翼状螺旋转录因子基因的稳定持续和高水平表达，而其表达降低不仅使得CD4+CD25+T细胞调节性功能丧失，还使得CD4+T细胞更易于分化为Th2细胞，从而诱发多种重大免疫相关性疾病，其中与自身免疫性疾病的生理病变进程密切相关[6]。
本研究结果显示，CD4+CD25+细胞/CD4+T淋巴细胞和CD4+CD25+Foxp3+T细胞/CD4+细胞在持续性ITP组和慢性ITP组降低，在新诊断ITP组CD4+CD25+Foxp3+T细胞/CD4+细胞降低，提示CD4+CD25+和CD4+CD25+Foxp3+Treg免疫调节功能异常是ITP发病的重要机制。故笔者认为，T、B淋巴细胞免疫功能失衡在儿童持续性和慢性ITP的发病机制中起着重要作用 ......
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