应用总氧自由基清除能力法检测葡萄籽提取物的抗氧化性(2)
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参见附件(2003KB，2页)。
参照《中国药典》2010版一部附录ⅨG、ⅦG以及文献[13]分别测定GSE的干燥失重、水中不容物(试液浓度1%、25℃)、pH值(试液浓度1%、溶于水)、原花青素含量(紫外分光光度法，λ280 nm)，以确定提取物的质量。
1.4 TOSC测定
本方法已在文献[10]中详述，采用气相色谱法(GC)检测反应产物乙烯，并以TOSC值指示抗氧化剂的抗氧化性以0.1 mmol/L磷酸盐缓冲液(PBS，pH7.4)，配制0.2 mol/L ABAP和0.25 mmol/L KMBA(均为用前临配，4℃避光贮存)；在20 ml顶空瓶内分别按样品管(KMBA 0.8 ml+样液0.1 ml)、对照管(KMBA 0.8 ml+PBS 0.1 ml)加入相应试剂，密封后用1.0 ml注射器注入0.1 ml ABAP，使溶液终体积为1 ml；置35℃恒温水浴振荡60 min，立即注入30%三氯醋酸溶液0.3 ml终止反应，再用1 ml气密性进样器抽取顶空气体200 μl用于GC分析。
GC检测条件：SPB-1毛细管色谱柱(30 m×0.32 mm×0.25 μm)，进样器、柱温箱、检测器的温度分别为150℃、60℃、200℃，火焰离子化检测器(FID)，载气(N2)流速1 ml/min，分流比20∶1。
精确称取一定量GSE干燥粉末，用0.1 mmol/L PBS溶解并调整pH值至7.4，每份试样6个平行，按照上述方法进行测定，同时做空白对照。TOSC测定结果以x±sD表示，并观察试样TOSC值的浓度-反应关系。
2 结果
2.1 GSE的理化指标
葡萄籽提取物(GSE)的干燥失重3.47%，水不溶物占20.3%，pH值为4.13，原花青素含量为81.1%，GSE得率为12.8%。
2.2 TOSC测定结果
测定了0.5～100.0 mg/ml浓度范围内GSE试样的TOSC值(表1)。结果显示GSE的TOSC与其浓度呈正相关；在一定浓度范围内(0.5～10.0 mg/ml)有较好的线性关系，相关系数为0.864(n=6)。
3 讨论
目前葡萄籽提取物作为天然抗氧化剂(自由基清除剂)，已在保健食品、心血管药物、化妆品等领域得到应用。天然植物提取物的抗氧化性评价方法是相关研究的重要内容。本研究初步考察了TOSC法评价GSE抗氧化性的适用性，其特性在于采用GC法检测乙烯，具备灵敏、快速等优点；通过检测体系对照管的控制，减少分析条件波动的影响。检测体系中的KMBA也能接受在其他自由基的攻击而产生乙烯(如Fenton反应产生羟自由基、热解3-morpholinosydnomine产生过氧亚硝基自由基等)[14]，可以此拓展TOSC法的应用范围。
[参考文献]
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[7]Ghiselli A,Serafini M,Malani G,et al.A fluorescence-based metho for measuring total plasma antioxidant capability[J] ......
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