HPLC法测定双花百合片中绿原酸的含量
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[摘要] 目的：建立双花百合片中绿原酸的含量测定方法。方法：采用HPLC法，色谱柱为Eclispse XDB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)色谱柱，流动相为0.4%磷酸溶液-乙腈(85∶15)，柱温为25℃，流速为0.8 ml/min，检测波长为327 nm。结果：绿原酸在0.10~5.00 μg范围内呈良好的线性关系(r=0.999 7)，平均回收率为99.60%，RSD=1.56%(n=6)；测得3个批次双花百合片样品中绿原酸含量分别为0.08、0.10、0.09 mg/片。结论：该方法操作简单，灵敏度高，重现性好，测定结果可靠，可用于双花百合片中绿原酸含量的测定。
[关键词] 双花百合片；绿原酸；含量测定；高效液相色谱法
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] C[文章编号] 1674-4721(2011)07(b)-038-02
Determination of chlorogenic acid in Shuanghua Baihe tablet by HPLC
SHI Guoju
Department of Pharmacy, People's Hospital in Shangcai County, Henan Province, Shangcai 463800, China
[Abstract] Objective: To establish the method for determination of the chlorogenic acid in Shuanghua Baihe tablet. Methods: Eclispse XDB C18 (4.6 mm×250 mm, 5 μm) was used as stationary phase, 0.4% phosphoric acid-acetonitrile (15:85) was used as mobile phase, at the rate of 0.8 ml/min, the detective wavelength was 327 nm. Results: The linear range of chlorogenic acid was between 0.10 and 5.00 μg (r=0.999 7), and the average recoveries was 99.60%, RSD was 1.56% (n=6). Each tablet contains chlorogenic acid 0.08, 0.10, 0.09 mg in 3 batches of sample. Conclusion: The method is simple, high sensitivity, good reproducibility and reliable in results, and can be used as the determination of the chlorogenic acid in Shuanghua baihe tablet.
[Key words] Shuanghua Baihe tablet; Chlorogenic acid; Determination of contents; HPLC
双花百合片是由黄连、苦地丁、生地黄、板蓝根、紫草、金银花、淡竹叶、蛇胆、百合、细辛等药味组成的中成药制剂，具有清热泻火，解毒凉血之功效，可用于复发性口腔溃疡、口腔白斑、口腔扁平苔藓、白塞综合征等病症[1]，绿原酸是该方药中的重要抗菌活性成分。为控制双花百合片的内在质量，本研究特采用HPLC法测定该制剂中绿原酸的含量，为双花百合片的质量控制提供了参考性资料。现将资料报道如下：
1 仪器与试药
1.1 仪器
Agilent1200型高效液相色谱仪：四元梯度泵，柱温箱，二级管阵列检测器，Chemistation色谱工作软件；KQ-700DV型数控超声波清洗器(昆山市超声波仪器有限公司)；FA1004型电子分析天平(上海良平仪器仪表有限公司)。
1.2 试药
绿原酸对照品(中国药品生物制品检定所，批号110753-200811，供含量测定用)；乙腈、甲醇为色谱纯，水为重蒸馏水，其他试剂均为分析纯；双花百合片(自制，批号100318、100412、100509)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Eclispse XDB C18(4.6 mm×250 mm，5 μm)；流动相：0.4%磷酸溶液-乙腈(85∶15)；检测波长：327 nm；流速：0.8 ml/min；柱温：25℃；理论板数按绿原酸峰计，应不低于5 000[2-3]。
2.2 对照品溶液的制备
取绿原酸对照品适量，精密称定，至100 ml棕色量瓶中，用50%甲醇溶解并定容至刻度，摇匀，得浓度为0.50 mg/ml的绿原酸对照品溶液，备用。
2.3 供试品溶液的制备
取双花百合片10片，精密称定，研细，取适量(约相当于5片的量)，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%甲醇50 ml，称定重量，超声处理30 min，放冷，再称定重量，用甲醇补足缺失的重量，摇匀，微孔滤膜滤过，弃初滤液，取续滤液作为供试品溶液[4]。
2.4 线性关系考察
精密吸取对照品储备液0.1、0.5、1、2、4、5 ml，分别置于5 ml容量瓶中，分别用甲醇稀释至刻度，摇匀，吸取以上对照品溶液各10 μl注入高效液相色谱仪，测定峰面积，以峰面积(Y)为纵坐标，绿原酸对照品进样量(X)为横坐标，进行线性回归。得回归方程为Y=1 364.47X+6.10，r=0.999 7，结果表明，绿原酸在0.10~5.00 μg范围内有良好的线性关系。
2.5 稳定性试验
取同一份供试品溶液分别在0、2、4、6、8、12 h，按上述色谱条件进样，测定绿原酸的色谱峰面积，结果峰面积的RSD 为1.29%，表明供试品溶液在12 h内基本稳定。
2.6 精密度试验
精密吸取浓度为0.50 mg/ml的绿原酸对照品溶液，按上述色谱条件进样，重复进样5次，测定绿原酸的色谱峰面积，结果峰面积的RSD为1.32%，表明该仪器的精密度较好。
2.7 重复性试验 ......
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