高效液相色谱-串联质谱法检测虾中9种磺胺类药物的残留(2)
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1.3 分析条件
1.3.1 色谱条件色谱柱：菲罗门Gemini C18，5 μm，4.6×150 mm或相当者；进样量：50 μl；柱温：30 ℃；流动相：A相为乙腈、B相0.50 mmol/L醋酸铵溶液；流速：0.80 ml/min；梯度洗脱条件见表1。
1.3.2 质谱条件大气电喷雾离子源ESI，正离子模式；多反应监测(MRM)；离子源喷雾器电压(IS)：5 500 V；离子源温度：450℃；帘气0.4 MPa、雾化气0.6 MPa、辅助加热气0.7 MPa、碰撞气0.4 MPa均为高纯氮气；使用前应调节各气体流量以使质谱灵敏度达到检测要求。
2 结果与讨论
2.1 结果
2.1.1 线性关系配制浓度为0.0、5.0、12.5、25.0、50.0、100.0 ng/ml的标准溶液，按设定色谱条件进行线性分析，以溶液浓度(ng/ml)为X，对峰面积为Y绘制标准工作曲线。结果表明，各种化合物的质量浓度在0～100 ng/ml范围内线性良好，相关系数均大于0.999 0。
2.1.2 检出限与定量限在 5 μg/kg添加水平时，各药物峰的信噪比均大于3，故将其定为检出限。在 10 μg/kg添加水平时，各药物峰的信噪比均大于10，且回收率、相对标准偏差(RSD)满足条件，故将其定为定量限。
2.1.3 添加回收率的验证以阴性虾为基质，分别向其中加入5 μg/kg和10 μg/kg浓度的磺胺类药物混合标准溶液，进行提取、净化及色谱分析。每个添加水平作 6份平行测定，结果表明：平均回收率为75.3%～95.6%；相对标准偏差为4.5%～13.5%；结果见表2。
2.2 讨论
2.2.1 提取条件以乙腈、乙酸乙酯和二氯甲烷作为提取剂，在同一添加水平和相同试验条件下：经乙酸乙酯提取检测时发现磺胺嘧啶、磺胺喹恶唑等回收率低，且提取液也将样品中大量脂肪带入，使净化难。二氯甲烷提取液浑浊，净化难度大。乙腈提取效率最高，脂肪带入少，易净化，但是由于样品组织中水较多，导致浓缩效率低，因此在加入乙腈前，先加入无水硫酸钠除水。为使其蒸发效率加快，加入异丙醇可使乙腈旋转蒸发时避免爆沸，在定容后再加少量正己烷除去剩余脂肪[6-7]。
2.2.2 流动相的选择流动相的pH值对 SAs的分离和保留具有显著的影响[7]。实验比较了不同浓度的甲醇乙酸、甲酸与乙腈配比梯度洗脱，比较发现乙腈、0.50 mmol/L醋酸铵溶液为流动相，可以保证理想的分离度，同时配上合适的梯度淋洗条件，较好地实现了SAs的分离，9种磺胺类药物均能达到基线分离，峰形尖锐，峰对称性好。
2.2.3 质谱条件的优化根据磺胺药物的分子结构，实验表明：磺胺在离子源 ESI+电离方式下，通过全扫描确定[M+H]+离子峰，分别以此为母离子进行二级质谱分析，找出二级质谱中两个信号最强的碎片离子，以母离子和子离子组成监测离子对，见表2。以MRM 的方式对样品进行定性和定量分析，如图1所示。
Fig.1 Totalion current chromatograms of mixed 9 sulfonamide standards
注：1.SD；2.SCP；3.SMP；4.SDD；5.SMZ；6.SMM；7.SDD；8.SQX；9.SDM
3 结论
本方法以乙腈-0.50 mmol/L醋酸铵溶液为流动相，采用离子源ESI+；多反应监测(MRM)检测模式，建立了虾中9种磺胺类药物残留的HPLC-MS/MS测定方法。方法准确、可靠，且方法的定量限达到5 μg/kg以下，有极高的检测灵敏度，满足于低含量样品的测定，在本地区水产品的进出口检验检疫中得到很好的应用。
[参考文献]
[1]段振娟,张鸿雁,王硕.动物性食品中磺胺类药物残留分析研究进展[J].食品研究与开发,2007,28(6):149-152.
[2]万春花,龙洲雄.磺胺类药物残留的色谱分析进展[J].现代科学仪器,2008,18(2):99-104.
[3]游辉,于辉,武颜文,等.快速溶剂萃取-高效液相色谱法同时测定牛肉中5种磺胺类药物残留[J] ......
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