益气化瘀颗粒剂质量标准研究(2)
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参见附件。
2.5 赤芍的鉴别
取本品5 g，加乙醇10 mL，振摇5 min，滤过，滤液蒸干，残渣加乙醇2 mL使溶解，作为供试品溶液。另取芍药苷对照品，加乙醇制成每1 mL含2 mg的溶液，作为对照品溶液。按照薄层色谱法[1]试验，吸取上述两种溶液各4 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-甲酸(40∶5∶10∶0.2)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以5%香草醛硫酸溶液，加热至斑点显色清晰。供试品色谱中，在与对照品色谱相应的位置上，显相同的蓝紫色斑点。
3 黄芪甲苷的含量测定
3.1 色谱条件
色谱柱：Zorbar C18柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)；柱温：30℃；流动相：乙腈-水(32：68)；流速：1.0 mL/min；漂移管温度：45℃；气体流速：3.0 L/min；温度：室温；进样量：20 μL。
3.2 试液配制
精密称取黄芪甲苷对照品7.5 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇溶解，定容，制成质量浓度为0.15 g/L的对照品溶液。
取本品适量研成细粉，精密称取1 g，置索氏提取器中，加甲醇40 mL冷浸过夜，再加甲醇适量，加热回流4 h，回收甲醇并浓缩至干，残渣加水20 mL 使溶解，用水饱和的正丁醇振摇提取4次，每次40 mL，合并正丁醇液，再用氨试液洗涤4次，每次40 mL，弃去氨试液，合并正丁醇，蒸干，残渣加甲醇溶解，转移至5 mL容量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，作为供试品溶液。
取缺黄芪的阴性对照样品1 g，按供试品溶液制备方法制成阴性对照品溶液。
3.3 方法学考察
分别按相关标准做阴性干扰试验，线性关系考察，精密度试验，重复性试验，稳定性试验。最后做加样回收试验：取已知含量的样品(批号为110513)粉末共6份，每份约1 g，精密称定，分别加入0.4、0.5、0.6 mL质量浓度为0.15 g/L的黄芪甲苷对照品溶液，按规定制备供试品溶液，分别吸取20 μL，注入色谱仪，记录峰面积，计算回收率，结果见表1。
3.4 样品含量测定
分别取3批样品，依法制备供试品溶液，注入液相色谱仪测定，以外标两点法计算。结果批号为110321，110413， 110513的样品中，黄芪甲苷含量分别为0.062 4、0.080 3、0.078 3 mg/g。
4 讨论
黄芪是方中主药，其主要有效成分为黄芪甲苷，药典以黄芪甲苷含量为黄芪药材及含黄芪复方制剂质量控制指标。庞兴寿等[6]的研究发现，黄芪甲苷进样量在25.52～127.6 μg范围内的对数值与峰面积的对数值线性关系良好(r = 0.999 3)，平均回收率为96.89%，RSD为1.44%(n = 6)，认为该方法无干扰，准确、重现性良好，可作为产品的质量控制方法。王伟兰等[7]采用蒸发光散射检测器对黄芪健胃膏中的黄芪甲苷进行HPLC分析，黄芪甲苷在1.2～14.0 μg范围内，具有良好的线性关系(r = 0.999 7)，平均加样回收率为98.7%，RSD为0.98%。刘慧珍[8]建立胃疡灵颗粒中黄芪甲苷的含量测定的HPLC-ELSD方法，结果表明，线性范围为0.37～7.46 μg，r =0.999 9；回收率为97.0%，RSD为1.2%(n = 6)。认为HPLC-ELSD法灵敏、可靠、准确、重复性好，可作为胃疡灵颗粒的质量控制方法。
本文结果也表明，采用高效液相色谱-蒸发光散射器法测定益气化瘀颗粒剂中黄芪甲苷含量，方法简便，结果准确，灵敏度高，重现性好。采用薄层色谱法对中药材进行定性鉴别，结果各薄层斑点不受阴性对照干扰，斑点清晰，专属性强。本测定方法简便、准确，可作为该制剂的质量控制标准。
[参考文献]
[1] 国家药典委员会. 中华人民共和国药典(一部)[M]. 北京：化学工业出版社，2005：附录6，31.
[2] 田丰，邓英杰. HPLC法测定黄芪中的黄芪甲苷含量[J]. 沈阳药科大学学报，2000，17(1)：43-45.
[3] 余灏，杨胜华. 黄芪甲苷分析方法研究概况[J]. 华西药学杂志，1993，8(3)：163-166 ......
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