消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响
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胡先平 丁亚山 钱滔来 深圳市第五人民医院麻醉科;
【摘要】目的观察消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响,筛选出获取高产量胰岛素的最佳消化时间。方法将75只雄性SD大鼠根据随机化原则按消化时间分为5组:Ⅰ组(10min)、Ⅱ组(12.5min)、Ⅲ组(15min)、Ⅳ组(17.5min)和Ⅴ组(20min),每组15只。通过胆总管灌注胶原酶Ⅴ来消化大鼠胰腺,分离胰岛,采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛。以双硫腙染色鉴定胰岛,丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率,根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量,葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。结果分离的大鼠胰岛具有较好的质量,胰岛纯度为95%左右,活率为90%左右,体外培养中生长良好。在不同消化时间下,各组胰岛产量由低到高为:10min组20min组12.5min组17.5min组15min组。消化时间在15min时,获得胰岛产量最高(P0.05),获得的胰岛数量和IEQ量分别为445.27±66.50和614.46±85.50。其次为17.5min组,获得胰岛数量和IEQ量分别为401.80±62.80和539.84±76.89。在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为(1.346±0.128)ng/mL和(2.565±0.208)ng/mL,差异具有统计学意义(P0.05),刺激指数为1.908±0.152,提示胰岛细胞功能良好。结论进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度在最佳消化时间为15～17.5min,可获得稳定高产量的胰岛,过短和过长的消化时间都是不适宜的。
【关键词】 消化时间 大鼠 胰岛 产量
【分类号】R587.1
用胰岛移植来治疗糖尿病的研究在近几十年来得到了很大的发展,然而,胰岛供体数量不足仍然是影响胰岛细胞移植疗效的关键环节之一[1]。本研究中,重点讨论消化时间对大鼠胰岛分离与提纯的影响,为胰岛提纯条件的优化积累经[作者简介]胡先平(1974-),男,本科学历,主治医师,研究方向
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[摘要] 目的 观察消化时间对大鼠胰岛分离纯化产量的影响，筛选出获取高产量胰岛素的最佳消化时间。 方法 将75只雄性SD 大鼠根据随机化原则按消化时间分为5组：Ⅰ组(10 min)、Ⅱ组(12.5 min)、Ⅲ组(15 min)、Ⅳ组(17.5 min)和Ⅴ组(20 min)，每组15只。通过胆总管灌注胶原酶Ⅴ来消化大鼠胰腺，分离胰岛，采用不连续密度梯度Ficoll离心法纯化胰岛。以双硫腙染色鉴定胰岛，丫啶橙/碘丙啶染色鉴定胰岛细胞活率，根据胰岛直径计数所获胰岛的数量及胰岛当量，葡萄糖刺激胰岛素释放试验评估胰岛功能。 结果 分离的大鼠胰岛具有较好的质量，胰岛纯度为95%左右，活率为90%左右，体外培养中生长良好。在不同消化时间下，各组胰岛产量由低到高为：10 min组<20 min组<12.5 min组<17.5 min组<15 min组。消化时间在15 min时，获得胰岛产量最高(P < 0.05)，获得的胰岛数量和IEQ量分别为445.27±66.50和614.46±85.50。其次为17.5 min组，获得胰岛数量和IEQ量分别为401.80±62.80和539.84±76.89。在低糖和高糖刺激下胰岛素释放分别为(1.346±0.128) ng/mL和(2.565±0.208) ng/mL，差异具有统计学意义(P < 0.05)，刺激指数为1.908±0.152，提示胰岛细胞功能良好。 结论 进行大鼠胰岛分离纯化时最适宜的胶原酶浓度在最佳消化时间为15～17.5 min，可获得稳定高产量的胰岛，过短和过长的消化时间都是不适宜的。
[关键词] 消化时间；大鼠；胰岛；产量
[中图分类号] R2-33[文献标识码] A[文章编号] 1674-4721(2012)05(b)-0027-03
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