骨髓增生异常综合征异常克隆分布及与外周血细胞变化的关系(1)
[摘要] 目的 探讨不同染色体异常的骨髓增生异常综合征(MDS)患者异常克隆在骨髓各细胞系列中的分布及其与外周血细胞变化的关系。 方法 对del(20q)，8号染色体三体和含有5q-复杂核型的MDS患者和核型正常者的骨髓涂片进行Wright-Giemsa染色，并行荧光原位杂交检测，统计其红系、粒系、淋巴系细胞的荧光信号后与临床指标相比较。 结果 异常克隆在MDS患者红系中的比例分别为92.4%、56.4%、57.6%、63.2%、60.2%；粒系中的比例分别为71.2%、68.1%、72.4%、44.4%和49.3%，均高于对照组；异常克隆在淋巴系中的比例除在病例2三体8的患者中高于对照组，其余均低于对照组。异常克隆分布在红系和粒系的患者，外周血细胞水平可表现为正常或降低(Hb 48～132 g/L，ANC 0.38×109/L～2.60×109/L)。病例2三体8的患者外周血淋巴细胞比例较高。 结论 MDS异常克隆主要分布于骨髓粒系和红系细胞，个别患者分布于淋巴细胞。异常克隆在骨髓细胞系列中的分布与外周血细胞变化无明显相关性。
, http://www.100md.com [关键词] 骨髓增生异常综合征；克隆；外周血细胞；关系
[中图分类号] R557+.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)08(b)-0008-03
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性克隆性疾病[1]，临床特征是外周血细胞一系或多系减少，骨髓有核细胞增多且形态异常，可伴有原始细胞增多，高风险转化为急性髓性白血病[2-3]。异常克隆在骨髓各细胞中的分布如何？异常克隆分布的细胞系列外周血细胞数量是减少还是维持正常？二者是否存在相互关系？本研究通过形态学分类联合荧光原位杂交(FISH)检测不同染色体异常的MDS患者异常克隆在骨髓各细胞系列中的分布后结合患者的临床资料进行了相关分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
, http://www.100md.com
收集5例MDS患者，按WHO标准分型[4]，1例del(20q)患者为难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)，外周血仅白细胞减少，骨髓原始细胞占7%。3例三体8患者其中2例为难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)，1例为难治性贫血(RA)。1例为含有5q-复杂核型异常，诊断为MDS-RCMD。具体临床和血液学资料及染色体核型分析见表1。对照组为正常核型者。
1.2 检测方法
1.2.1 骨髓涂片细胞的定位 骨髓细胞涂片进行Wright-Giemsa 染色。荧光显微镜油浸镜下在涂片的体尾部，细胞分布均匀处寻找红系、粒系和淋巴细胞，分类，记录标尺位置，拍照，保存。形态不易辨认的细胞不记录。
1.2.2 骨髓涂片预处理 将玻片脱色晾干， 在37°C温箱预热后，滴加0.02%胃蛋白酶消化液，消化3 h。消化结束后洗涤、老化、脱水后晾干。
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1.2.3 FISH检测分析 将骨髓涂片预处理后的标本分别进行FISH检测[5]。LSI D20S108探针和Telvysion 20p 探针加在del(20q)患者及其对照组的标本上；CEP 8探针加在三体8患者及其对照组的标本上，LSI EGR1/D5S23：D5S721探针加在含有5q-复杂核型异常的患者及其对照组的标本上，在原位杂交仪上进行变性杂交，杂交后洗涤复染。同一荧光显微镜下根据标尺细胞定位在DAPI/FITC/Cy5/TRITC滤色片激发下观察细胞的荧光杂交信号，摄像头拍照。应用分析系统处理图片。记录标记细胞的橙色荧光信号和绿色荧光信号的个数。
1.2.4 阳性结果判断 del(20q) 异常信号为1个或>2个橙色荧光信号和2个绿色荧光信号；三体8异常信号为3个橙色荧光信号。含有5q-复杂核型异常信号为1个橙色荧光信号和2个绿色荧光信号。阳性细胞百分率大于x+2s作为克隆性异常的标准。
2 结果
, 百拇医药
2.1 LSI D20S108探针/Telvysion 20p 探针
对照组粒系、红系和淋巴系有1个橙色和2个绿色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(3.66±2.03)%、(3.44±1.52)%和(3.95±1.92)%，故阳性判断标准分别为>7.72%、>6.48%和>7.79%。del(20q)的MDS患者1，标记的粒细胞共73个，异常克隆百分率为71.2%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为105个和48个，异常克隆百分率分别为92.4%和4.17%。
2.2 CEP 8探针
对照组粒系、红系和淋巴系细胞有3个橙色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(2.24±0.51)%、(1.87±1.02)%和(2.53±0.86)%，故阳性判断标准分别为>3.26%、>3.91%和>4.25%。
三体8的MDS患者2：标记的粒细胞共116个，其中显示为+8异常克隆的细胞为79个，百分率为68.1%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为55个和47个，异常克隆百分率为56.4%和10.6%。
, 百拇医药
+8的MDS患者3：标记的粒细胞共134个，其中显示为+8异常克隆的细胞为97个，百分率为72.4%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为59个和12个，异常克隆百分率分别为57.6%和0。
+8的MDS患者4：标记的粒细胞、红系前体细胞和淋巴细胞分别为63个、76个和50个，异常克隆百分率分别为44.4%、63.2%和2.0%。
2.3 LSI EGR1/D5S23：D5S721探针
对照组粒系、红系和淋巴系有1个橙色和2个绿色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(2.92%±1.74)%、(2.64%±1.70)%和(2.32±1.93)%，故阳性判定标准分别为>6.40%、6.04%和6.18%。含有5q-复杂核型的MDS患者5，标记的粒细胞共71个，百分率为49.3%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为118个和52个，异常克隆百分率分别为60.2%和3.85%。, 百拇医药(秦玲 周莉莉 刘珂 伍星)
, http://www.100md.com [关键词] 骨髓增生异常综合征；克隆；外周血细胞；关系
[中图分类号] R557+.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)08(b)-0008-03
骨髓增生异常综合征(MDS)是一组异质性克隆性疾病[1]，临床特征是外周血细胞一系或多系减少，骨髓有核细胞增多且形态异常，可伴有原始细胞增多，高风险转化为急性髓性白血病[2-3]。异常克隆在骨髓各细胞中的分布如何？异常克隆分布的细胞系列外周血细胞数量是减少还是维持正常？二者是否存在相互关系？本研究通过形态学分类联合荧光原位杂交(FISH)检测不同染色体异常的MDS患者异常克隆在骨髓各细胞系列中的分布后结合患者的临床资料进行了相关分析。
1 资料与方法
1.1 一般资料
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收集5例MDS患者，按WHO标准分型[4]，1例del(20q)患者为难治性贫血伴原始细胞增多-1(RAEB-1)，外周血仅白细胞减少，骨髓原始细胞占7%。3例三体8患者其中2例为难治性血细胞减少伴多系发育异常(RCMD)，1例为难治性贫血(RA)。1例为含有5q-复杂核型异常，诊断为MDS-RCMD。具体临床和血液学资料及染色体核型分析见表1。对照组为正常核型者。
1.2 检测方法
1.2.1 骨髓涂片细胞的定位 骨髓细胞涂片进行Wright-Giemsa 染色。荧光显微镜油浸镜下在涂片的体尾部，细胞分布均匀处寻找红系、粒系和淋巴细胞，分类，记录标尺位置，拍照，保存。形态不易辨认的细胞不记录。
1.2.2 骨髓涂片预处理 将玻片脱色晾干， 在37°C温箱预热后，滴加0.02%胃蛋白酶消化液，消化3 h。消化结束后洗涤、老化、脱水后晾干。
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1.2.3 FISH检测分析 将骨髓涂片预处理后的标本分别进行FISH检测[5]。LSI D20S108探针和Telvysion 20p 探针加在del(20q)患者及其对照组的标本上；CEP 8探针加在三体8患者及其对照组的标本上，LSI EGR1/D5S23：D5S721探针加在含有5q-复杂核型异常的患者及其对照组的标本上，在原位杂交仪上进行变性杂交，杂交后洗涤复染。同一荧光显微镜下根据标尺细胞定位在DAPI/FITC/Cy5/TRITC滤色片激发下观察细胞的荧光杂交信号，摄像头拍照。应用分析系统处理图片。记录标记细胞的橙色荧光信号和绿色荧光信号的个数。
1.2.4 阳性结果判断 del(20q) 异常信号为1个或>2个橙色荧光信号和2个绿色荧光信号；三体8异常信号为3个橙色荧光信号。含有5q-复杂核型异常信号为1个橙色荧光信号和2个绿色荧光信号。阳性细胞百分率大于x+2s作为克隆性异常的标准。
2 结果
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2.1 LSI D20S108探针/Telvysion 20p 探针
对照组粒系、红系和淋巴系有1个橙色和2个绿色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(3.66±2.03)%、(3.44±1.52)%和(3.95±1.92)%，故阳性判断标准分别为>7.72%、>6.48%和>7.79%。del(20q)的MDS患者1，标记的粒细胞共73个，异常克隆百分率为71.2%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为105个和48个，异常克隆百分率分别为92.4%和4.17%。
2.2 CEP 8探针
对照组粒系、红系和淋巴系细胞有3个橙色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(2.24±0.51)%、(1.87±1.02)%和(2.53±0.86)%，故阳性判断标准分别为>3.26%、>3.91%和>4.25%。
三体8的MDS患者2：标记的粒细胞共116个，其中显示为+8异常克隆的细胞为79个，百分率为68.1%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为55个和47个，异常克隆百分率为56.4%和10.6%。
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+8的MDS患者3：标记的粒细胞共134个，其中显示为+8异常克隆的细胞为97个，百分率为72.4%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为59个和12个，异常克隆百分率分别为57.6%和0。
+8的MDS患者4：标记的粒细胞、红系前体细胞和淋巴细胞分别为63个、76个和50个，异常克隆百分率分别为44.4%、63.2%和2.0%。
2.3 LSI EGR1/D5S23：D5S721探针
对照组粒系、红系和淋巴系有1个橙色和2个绿色荧光杂交信号的细胞百分比分别为(2.92%±1.74)%、(2.64%±1.70)%和(2.32±1.93)%，故阳性判定标准分别为>6.40%、6.04%和6.18%。含有5q-复杂核型的MDS患者5，标记的粒细胞共71个，百分率为49.3%；标记的红系前体细胞和淋巴细胞分别为118个和52个，异常克隆百分率分别为60.2%和3.85%。, 百拇医药(秦玲 周莉莉 刘珂 伍星)