绞股蓝提取物对糖尿病肾病大鼠血液流变学和炎性因子影响的实验研究(1)
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[摘要] 目的 初步探讨绞股蓝提取物对糖尿病肾病大鼠血液流变学和炎性因子的影响。 方法 将40只Wistar大鼠随机分为空白对照组、模型组、绞股蓝大剂量组(5 mg/kg)和小剂量组(2.5 mg/kg)；模型组、大剂量组和小剂量组大鼠使用腹腔注射链脲佐菌素方法制作糖尿病肾病模型；绞股蓝大小剂量组按照上述剂量给予绞股蓝提取物灌胃，1次/d，持续10周，空白对照组和模型组则给予同剂量蒸馏水灌胃；实验结束时腹主动脉取血检测血液黏度、总胆固醇、三酰甘油及炎症因子。 结果 绞股蓝提取物可以有效降低糖尿病肾病大鼠血液黏度、血浆黏度及总胆固醇和三酰甘油水平，与模型组比较差异具有统计学意义(P < 0.05)；同时可明显降低糖尿病肾病大鼠血清TNF-α、IL-6和CRP水平，与模型组比较差异具有统计学意义(P < 0.05)。 结论 绞股蓝提取物具有改善糖尿病肾病大鼠血液流变学及微炎症状态的作用，值得进一步研究。
[关键词] 糖尿病肾病；绞股蓝提取物；血液流变学；炎症因子
[中图分类号] R-33 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)11(b)-0012-03
糖尿病肾病(DN)是糖尿病微血管并发症之一，早期症状不明显，晚期常导致患者慢性肾功能不全，是糖尿病患者的重要死亡原因。在DN的发生发展过程中，血流动力学异常起着关键的作用，甚至可能是始动因素[1]，其次，相关研究表明以肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)及C反应蛋白(CRP)为代表的炎症介质，也被认为对DN的发病起着不同程度的促进作用[2]。现代药理学研究证明绞股蓝具有降低血脂、降血压、防止衰老、抑制肿瘤、增强免疫力、镇静止痛、保护心脏和肝脏、抗动脉粥样硬化、保护血管等作用[3]。有关绞股蓝提取物对DN患者血液流变学及炎症因子影响的基础研究鲜有报道，因此笔者以该立据为切入点进行了实验研究，现总结报道如下：
1 材料与方法
1.1 实验材料
取1.5 kg绞股蓝(购自绥宁县华润绞股蓝制品厂)，用捣碎机捣碎，过滤残渣，滤液备用，将残渣用950 mL/L乙醇对流提取2次，每次1 h，合并滤液，减压回收至无乙醇味。分别予石油醚及乙酸乙酯萃取，最后用蒸馏水稀释，制成不同浓度的绞股蓝乙酸乙酯提取物保存备用[4]；上述流程均在本院药剂科完成。
1.2 试剂及仪器
链脲佐菌素(streptozocin，STZ，由由北京中生瑞泰科技有限公司提供)；大鼠TNF-α、IL-6酶联免疫试剂盒(96T，由上海轩昊科技发展有限公司提供)；CRP免疫比浊法试剂盒 (由北京绿源博德生物科技有限公司提供)；0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液(生产批号：T2011467，由北京化工厂生产)；血糖试纸(由德国宝丽曼公司提供)；血液流变仪(型号：LB-2AV，由上海富众生物科学有限公司提供)；全自动生化分析仪(型号：GRT3000，由济南格利特公司提供)。
1.3 实验动物
Wistar大鼠40只(由长沙市开福区东创实验动物科技公司提供)，雌雄各半，6～8周龄，体重200～230 g，清洁级，普通喂养，自由进食。
1.4 DN模型制作
Wistar大鼠购入后进行适应性喂养，1周后按照文献[5]中的方法对随机抽取的30只大鼠建模，具体如下：空腹10 h后注射STZ(用0.1 mmol/L柠檬酸-柠檬酸钠缓冲液将STZ配制成浓度为1%的溶液，按40 mg/kg剂量注入大鼠腹腔内)；每周采大鼠尾部静脉血(空腹12 h)，使用血糖试纸测定血糖，当血糖持续≥16.7 mmol/L时可判定为大鼠糖尿病模型；STZ注射2周后，尿常规测定出尿蛋白阳性时，判定为DN形成。
1.5 分组及给药方法
10只未作任何处理的大鼠设立为空白对照组(A组)；30只建模成功的大鼠随机分为模型组(B组)、绞股蓝大剂量组(C组)和小剂量组(D组)；绞股蓝大小剂量组分别按5 mg/kg和2.5 mg/kg灌胃给药，每日1次；空白对照组和模型组按同容积蒸馏水进行灌胃，每日1次，共持续10周。
1.6 标本采集
造模后第0、2、5、8及10周，采大鼠空腹尾尖血进行血糖测试；造模后第10周时，禁食禁水12 h，乙醚麻醉下处死动物，经腹主动脉取血，分2份后-80℃独立保存待测。
1.7 指标检测
(1)血液流变学检测：一份血液标本经EDTA抗凝，用LB-2AV血液流变仪分别测定高切(94.5 s-1)、低切(0.945 s-1)、全血黏度及血浆黏度，采用全自动生化分析仪测定总胆固醇(TC)和三酰甘油(TG)；(2)炎症因子测定：另一份血液标本离心分离血清，使用ELISA法测定大鼠TNF-α、IL-6，使用免疫比浊法测定CRP，均按照试剂盒说明书严格操作。
1.8 统计学方法
应用SPSS 17.0统计软件包进行数据分析，数据以x±s表示，两独立样本计量资料比较采用t检验，多组数据之间的比较采用单变量方差分析，P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
实验期间共有4只大鼠死亡，其中B组死亡2只 ......
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