奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用
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[摘要] 目的 探讨奥扎格雷钠对大鼠脑缺血再灌注损伤的脑保护作用。 方法 采用Longas法制备大鼠脑缺血再灌注模型，分别用奥扎格雷钠(治疗组)和0.9%氯化钠注射液(对照组)腹腔注射。观察大鼠脑梗死体积、神经功能评分、细胞凋亡数和细胞凋亡率。 结果 治疗组比对照组大鼠脑梗死体积明显减小，神经凋亡数较对照组显著减少(P < 0.01)。对照组神经功能评分为(2.83±0.75)分，治疗组为(1.83±0.75)分，两组比较差异有统计学意义(P < 0.05)。3组细胞凋亡率比较，差异有统计学意义(P < 0.01)。 结论 奥扎格雷钠能明显减小脑缺血的梗死体积，减轻脑缺血再灌注后的神经损害，具有明显的脑保护作用。
[关键词] 奥扎格雷钠；脑缺血再灌注；神经细胞；凋亡
[中图分类号] R743 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)11(c)-0012-03
急性缺血性脑损伤是非常复杂的病理生理过程，主要是缺血后能量代谢障碍。缺血性脑损伤是中枢神经系统功能受损的重要原因之一，是当前防治脑血管疾病的热点。奥扎格雷钠是一种特异性血栓A2(TXA2)合成酶抑制剂，能降低TXA2浓度，促进前列环素I2(PGI2)的生成，并维持二者间的平衡，还能选择性地扩张血管，改善脑组织微循环和能量代谢，抗血小板聚集，有效地抑制血栓形成[1-3]。奥扎格雷钠目前已广泛用于治疗缺血性脑血管病，本研究采用大鼠脑缺血再灌注病理模型，观察奥扎格雷钠对脑缺血再灌注后神经细胞的保护作用，为临床应用提供理论依据。现报道如下：
1 材料与方法
1.1 材料
健康雄性Wistar大鼠84只，质量210～270 g，由山东省实验动物中心提供，随机分为盐水对照组(32只)、假手术组(20只)、奥扎格雷钠治疗组(32只)，观察3组仅缺血90 min(IR 0 h)和再灌注24 h(IR 24 h)两个时段的神经细胞凋亡数和凋亡率。
1.2 方法
大鼠脑缺血再灌注模型制作及给药 采用Longa Z等[4]报道的方法进行改进，术中室温保持24℃。用大鼠大脑中动脉线栓法(MCAO)制备脑缺血再灌注大鼠模型，具体操作如下：用6%水合氯醛(0.4～0.5 mL/100 g)腹腔内注射麻醉，取颈部正中切口，暴露颈总动脉，于其深处用细线穿住，分离颈内外动脉，于颈外动脉切一小口，用插线插入至颈总动脉，并下拉，由分叉处插入颈内动脉，然后收紧活结，松开颈总动脉夹，抽出深处的细线，缝合切口。栓塞2 h后进行长达12 h的再灌注。假手术组仅分离双侧颈总动脉，不阻断血流[5]。脑缺血的大鼠麻醉清醒后，具备向左侧转弯，左前肢不能伸直为研究对象。假手术组大鼠栓子插入仅9 mm。治疗组大鼠，于缺血前半小时和缺血后，分别向腹腔注射奥扎格雷钠水溶液(2 mg/kg)各一次，假手术组及对照组脑缺血大鼠，均在相同时间点，分别向腹腔注射等量的0.9%氯化钠注射液。
1.3 观察指标
1.3.1 神经功能评分 0分：无神经损伤体征；1分：提尾时不能完全伸直对侧前爪；2分：行走时向外侧转圈；3分：站立时向对侧倾斜；4分：不能行走，意识丧失。
1.3.2 细胞凋亡测定 在相应时间点，各组大鼠于评分后，分别取5只，麻醉处死。经枕骨大孔撑开颅骨，小心取处脑组织，迅速取出缺血边缘区新鲜脑组织50 mg，置于5℃ 75%乙醇中处理，用流式细胞仪(FACS420，山东省肿瘤研究所)检测细胞凋亡率。细胞凋亡率=凋亡细胞数/细胞总数×100%。
1.3.3 脑梗死体积测定 在预定时间点，治疗组和对照组各取6只大鼠，麻醉后断头处死，迅速取脑，置于冰箱中0.5 h后，在额极后，每间隔2 mm，连续取5个冠状脑切片，将切好的脑片立刻置于37℃ 2%红四氮唑磷酸缓冲液中避光，恒温孵育30 min，染色后，经10%多聚甲醛液固定24 h后封片，用球积分析仪系统进行分析，计算出梗死体积[3]。
1.4 统计学方法
采用SPSS 17 ......
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