抗人CDC7单克隆抗体的制备与鉴定
 |
| 第1页 |
参见附件。
李志广 张现伟 蒋小梅 旷兴林 魏大鹏 章崇杰 四川大学华西基础医学与法医学院免疫学教研室;
【摘要】目的制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。方法以GST-CDC7为免疫原,免疫Balb/c小鼠,取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合,经多次筛选及克隆化,建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA,WesternBlot,免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。结果筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a,轻链为kappa链,ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1:102400,抗体亲和常数为1.558×109L/mol,WesternBlotting分析表明,此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。结论成功制备了抗人CDC7单克隆抗体,为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。
【关键词】 细胞分裂周期蛋白激酶 单克隆抗体 DNA复制 制备 鉴定
【基金】四川大学青年科学基金资助项目(2009SCU11144)
【分类号】R392
细胞分裂周期蛋白激酶7(CDC7)是促进DNA合成的重要激酶,在真核生物中,CDC7由574个氨基酸组成并且稳定表达。分子量约64KDa,主要位于细胞核。CDC7激酶在细胞周期的G1期末启动DNA的合成,并且促进细胞由G1期进入S期[1]。CDC7与Dbf4结合成复合物,发挥其激酶活性。Dbf4是一个周期
------
[摘要] 目的 制备抗人CDC7蛋白的单克隆抗体并鉴定其生物学特性。 方法 以GST-CDC7为免疫原，免疫Balb/c小鼠，取其脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞(SP2/0细胞)融合，经多次筛选及克隆化，建立可以稳定分泌抗人CDC7单克隆抗体的杂交瘤细胞株。用间接ELISA，Western Blot，免疫细胞化学(ICC)对此抗体特性进行鉴定。 结果 筛选到1株能稳定分泌抗人CDC7的细胞株1F7D2C9。亚类鉴定为IgG2a，轻链为kappa链，ELISA法鉴定该抗体腹水效价为1∶102 400，抗体亲和常数为1.558×109 L/mol，Western Blotting分析表明，此抗体能特异识别细胞株的天然CDC7蛋白质。免疫细胞化学进一步显示CDC7分布于细胞核中。 结论 成功制备了抗人CDC7单克隆抗体，为研究CDC7与细胞癌变的关系建立了基础。
[关键词] 细胞分裂周期蛋白激酶7；单克隆抗体；DNA复制；制备；鉴定
[中图分类号] R392 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(b)-0013-03
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(2665kb)。