急性胰腺炎病程中TLR4/NF-κB炎症反应动态作用研究
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[摘要] 目的 探讨TLR4通过激活NF-κB在急性胰腺炎发病过程中的动态作用。 方法 应用凝胶迁移率改变分析法检测轻症和重症急性胰腺炎发病病程中不同时间段外周血中性粒细胞NF-κB的表达情况，并应用免疫荧光流式细胞技术检测外周血单核细胞TLR4的表达。 结果 入院第1天，MAP组、SAPⅠ组、SAPⅡ组TLR4表达及NF-κB活化水平显著升高，明显高于对照组，SAPⅠ组及SAPⅡ组TLR4表达较MAP组更为增高，随时间延长而逐渐下降。SAPⅠ、Ⅱ组、MAP组患者发病第1、3、7天外周血PMN内NF-κB蛋白活性及TLR4的表达与疾病的APACHEⅡ评分呈正相关。 结论 本项研究探讨了TLR4通过激活NF-κB，引起大量炎性递质的释放，从而动态地反映了人急性胰腺炎的发病及病情进展趋势。
[关键词] 急性胰腺炎；Toll样受体4；核因子-κB；动态作用
[中图分类号] R657.5+1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2012)12(c)-0007-03
急性胰腺炎(acute pancreatitis，AP)是临床常见急腹症，其中10%～15%可进展为重症急性胰腺炎(severe acute pancreatitis，SAP)，病情复杂，病死率高，其主要病因是在发病初期出现全身炎症反应综合征(systmic inflemmatery response syndromeme，SIRS)。迄今关于急性胰腺炎的病理机制有多种学说，但普遍都认同在急性胰腺炎动物模型的研究中NF-κB具有细胞信号传导的作用。先天性免疫系统的门户蛋白TLR4激活NF-κB，导致大量炎性递质产生，但这在人急性胰腺炎病情进展中的作用，尚未见相关报道。本项研究拟通过动态检测TLR4和NF-κB活性以探讨TLR4通过激活NF-κB在人急性胰腺炎发病过程中的动态变化及其与临床的关系。
1 资料与方法
1.1 一般资料
2008年1月～2009年12月从广东药学院附属第一医院和广州中医药大学第一附属医院的消化内科收集急性胰腺炎病例。急性胰腺炎的诊断依据参照中华医学会消化病学分会胰腺疾病学组2003年《中国急性胰腺炎诊治指南(草案)》。实验组为30例急性胰腺炎患者，其中，男18例，女12例，年龄29～76岁，平均(51.7±23.8)岁。 实验组病例分为3组：MAP组11例；SAPⅠ级组10例；SAPⅡ级组9例。排除标准包括存在重要脏器如心、肝、肾等严重并发症者。与此同时将20例健康人设为对照组，其中，男12例，女8例，年龄26～72岁，平均(48.3±23.6)岁。
1.2 实验技术条件
1.3 标本的收集及处理
急性胰腺炎患者在入院的第1、3、7天经静脉各采非抗凝血2 mL，EDTA抗凝血8 mL，对照组则采静脉血1次，分别做血浆分离后冻存。
1.4 临床评价
于第1、3、7天将3组患者按APACHEⅡ评分标准进行评分。
1.5 指标的检测
1.5.2 检测TLR4 (1)标本处理：离心后提取血浆，置冰箱冻存，用淋巴细胞分离液离心分离外周单核细胞(PBMCs)。分离出来的PBMCs 重悬于细胞冻存液中，置冰箱中冻存，用于随后的流式细胞仪检测。(2)流式细胞仪的检测：将冻存的急性胰腺炎患者的PBMCs标本取出，在流水中融化，并迅速加入2倍的全培养液，离心后弃去上清液，重悬复苏细胞于全培养液中，置于含CO2的培养箱中培养以恢复细胞活力。然后离心弃去上清液，将剩余细胞混匀后加入PE标记的抗人TLR4单克隆抗体，然后在流式细胞仪上检测，读取TLR4平均荧光强度值。
1.6 统计分析
采用SPSS 11.0 的统计分析软件进行统计学处理，通过卡方检验或t检验对各参数进行显著性检验或相关性检验。
3 讨论
该课题探讨了TLR4通过激活NF-κB，从而引起大量炎性递质的释放，动态和较全面地反映了人急性胰腺炎的发病机制以及病情的进展，为临床常见病、多发病之一的急性胰腺炎的防控提供了理论上的依据，为日后探讨急性胰腺炎的新疗法提供了新的思路。
[参考文献]
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