结核分枝杆菌实验室检测方法的研究进展(2)
2.3 细胞因子检测
活动性肺结核、结核性胸膜炎或脑膜炎患者血液中或局部组织的T淋巴细胞、单核细胞或巨噬细胞在MT抗原的激活下，释放可溶性白细胞介素2受体、膜IL-2受体、R干扰素、A肿瘤坏死因子，与正常人的或非结核性疾病差异有显著性[13]。采用双抗体夹心ELISA法检测其在血清，胸腔积液，脑脊液中的水平，对结核病具有辅助诊断和鉴定价值。
3 分子生物学诊断技术
3.1 定量PCR技术
是在定性PCR基础上改进扩增方法并采用新的检测方法进行定量。实时荧光定量PCR扩增时加入一对引物和一个特异性的荧光探针，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。灵敏度高于常规PCR，特异性更高，并解决了PCR污染问题，自动化程度高[14]。
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3.2 分枝杆菌分子菌种鉴定
分枝杆菌分子鉴定的方法有：PCR菌种鉴定方法；PCR直接测序鉴定法；PCR-DNA探针鉴定法；PCR-限制性片段长度多肽性鉴定法；PCR-单链构象多肽性分析鉴定法及PCR-基因芯片鉴定法等。前4种方法只能鉴别部分菌种，PCR-单链构象多肽性分析鉴定法可鉴别MT复合群和NTM。PCR-基因芯片鉴定法是通过杂交测序鉴定分枝杆菌菌种。这些菌种鉴定方法与传统的鉴定方法比较其共同特点就是快速。
3.3 分子药敏试验
目前MT耐药的分子机制部分已阐明。应用各种基因突变分析技术检测耐药基因突变，即可检出耐药的MT。不过有5%～40%的耐药分离株未能检测出耐药基因突变，说明可能有其他的耐药机制存在。
综上所述，随着社会的进步和现代科技的发展，临床实验室结核分枝杆菌相关的检测项目越来越多，检测技术和方法不断进步和发展，检测的方法更加快速、简便，敏感性和特异性更高，这给临床早发现和早诊治结核病提供了极其重要的诊断依据。
, 百拇医药
[参考文献]
[1] 路超，刘义庆，王长印，等. 结核病的分子生物学诊断技术研究进展[J]. 山东医药，2011，31(51)：112-113.
[2] 周世亮，周旭，蒋建勇. 比较四种方法对结核诊断的应用价值[J]. 实用预防医学，2009，16(2)：573-574.
[3] 曹全明，王晓博. 肺结核并存肺癌的影像诊断分析[J]. 内蒙古医学院学报，2006，28(6)：559-561.
[4] 林建雄，郑崇辉. BACTEC460-TB自动快速检测结核菌的临床应用及评价[J]. 国际医药卫生导报，2001，7(9)：94.
[5] Hanna BA，Ebrahimzadeh A，Elliott LB，et al. Multicenter evaluation of the BACTEC MGIT 960 system for recovery of mycobacteria[J]. J Clin Microbiol，1999，37(3)：748-752.
, 百拇医药
[6] 熊国亮，张慧慧，雷建平. 变色液体培养基快速检测分枝杆菌的临床应用评价[J]. 江西医学检验，2003，21(2)：253-255.
[7] Wilson SM，Al-Suwaidi Z，Mc Nerney R，et al. Evalurtion of a new rapid bacteriophage-based method for the drug suscepribility testing of mycobacterium tuberculosis[J]. Nat Med，1997，3(4)：465-468.
[8] Alcaide F，Galí N，Domínguez J，et al. Usefulness of a new M ycobacteriophage-based technique for rapid diagnisis of pulmonary tuberculosis[J]. J Clin Microbiol，2003，42(41)：2867-2871.
, 百拇医药
[9] 甘兵，张天托，王栋，等. 噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核分枝杆菌的应用比较[J]. 广东医学，2008，29(3)：441-442.
[10] 韩跃飞，张治国，杨小薇. 免疫印迹法检测结核抗体的临床应用体会[J]. 临床肺科杂志，2007，12(6)：639.
[11] 颜京瑞. 检测结核抗体对结核病的临床诊断价值[J]. 检验医学与临床，2010，7(2)：113-115.
[12] 张周云，熊国亮. 探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值[J]. 实验与检验医学，2010，28(6)：537-538.
[13] 闫伯强，胡天勇，杨宜平. 联合检测肿瘤坏死因子和抗结核杆菌抗体对结核病的临床意义[J]. 细胞与分子学免疫学杂志，2005，21(5)：182.
[14] 余春开，冯瑞娥. 结核分子生物学诊断技术的研究进展[J]. 中华肺部疾病杂志，2011，4(4)：324-329.
(收稿日期：2012-09-14 本文编辑：郭静娟), 百拇医药(凌显桢 罗建文)
活动性肺结核、结核性胸膜炎或脑膜炎患者血液中或局部组织的T淋巴细胞、单核细胞或巨噬细胞在MT抗原的激活下，释放可溶性白细胞介素2受体、膜IL-2受体、R干扰素、A肿瘤坏死因子，与正常人的或非结核性疾病差异有显著性[13]。采用双抗体夹心ELISA法检测其在血清，胸腔积液，脑脊液中的水平，对结核病具有辅助诊断和鉴定价值。
3 分子生物学诊断技术
3.1 定量PCR技术
是在定性PCR基础上改进扩增方法并采用新的检测方法进行定量。实时荧光定量PCR扩增时加入一对引物和一个特异性的荧光探针，利用荧光信号实时监测整个PCR进程，最后通过标准曲线对未知模板进行定量分析的方法。灵敏度高于常规PCR，特异性更高，并解决了PCR污染问题，自动化程度高[14]。
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3.2 分枝杆菌分子菌种鉴定
分枝杆菌分子鉴定的方法有：PCR菌种鉴定方法；PCR直接测序鉴定法；PCR-DNA探针鉴定法；PCR-限制性片段长度多肽性鉴定法；PCR-单链构象多肽性分析鉴定法及PCR-基因芯片鉴定法等。前4种方法只能鉴别部分菌种，PCR-单链构象多肽性分析鉴定法可鉴别MT复合群和NTM。PCR-基因芯片鉴定法是通过杂交测序鉴定分枝杆菌菌种。这些菌种鉴定方法与传统的鉴定方法比较其共同特点就是快速。
3.3 分子药敏试验
目前MT耐药的分子机制部分已阐明。应用各种基因突变分析技术检测耐药基因突变，即可检出耐药的MT。不过有5%～40%的耐药分离株未能检测出耐药基因突变，说明可能有其他的耐药机制存在。
综上所述，随着社会的进步和现代科技的发展，临床实验室结核分枝杆菌相关的检测项目越来越多，检测技术和方法不断进步和发展，检测的方法更加快速、简便，敏感性和特异性更高，这给临床早发现和早诊治结核病提供了极其重要的诊断依据。
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[参考文献]
[1] 路超，刘义庆，王长印，等. 结核病的分子生物学诊断技术研究进展[J]. 山东医药，2011，31(51)：112-113.
[2] 周世亮，周旭，蒋建勇. 比较四种方法对结核诊断的应用价值[J]. 实用预防医学，2009，16(2)：573-574.
[3] 曹全明，王晓博. 肺结核并存肺癌的影像诊断分析[J]. 内蒙古医学院学报，2006，28(6)：559-561.
[4] 林建雄，郑崇辉. BACTEC460-TB自动快速检测结核菌的临床应用及评价[J]. 国际医药卫生导报，2001，7(9)：94.
[5] Hanna BA，Ebrahimzadeh A，Elliott LB，et al. Multicenter evaluation of the BACTEC MGIT 960 system for recovery of mycobacteria[J]. J Clin Microbiol，1999，37(3)：748-752.
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[6] 熊国亮，张慧慧，雷建平. 变色液体培养基快速检测分枝杆菌的临床应用评价[J]. 江西医学检验，2003，21(2)：253-255.
[7] Wilson SM，Al-Suwaidi Z，Mc Nerney R，et al. Evalurtion of a new rapid bacteriophage-based method for the drug suscepribility testing of mycobacterium tuberculosis[J]. Nat Med，1997，3(4)：465-468.
[8] Alcaide F，Galí N，Domínguez J，et al. Usefulness of a new M ycobacteriophage-based technique for rapid diagnisis of pulmonary tuberculosis[J]. J Clin Microbiol，2003，42(41)：2867-2871.
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[9] 甘兵，张天托，王栋，等. 噬菌体生物扩增法与涂片法在快速检测结核分枝杆菌的应用比较[J]. 广东医学，2008，29(3)：441-442.
[10] 韩跃飞，张治国，杨小薇. 免疫印迹法检测结核抗体的临床应用体会[J]. 临床肺科杂志，2007，12(6)：639.
[11] 颜京瑞. 检测结核抗体对结核病的临床诊断价值[J]. 检验医学与临床，2010，7(2)：113-115.
[12] 张周云，熊国亮. 探讨ELISA法检测血清结核杆菌抗原对肺结核病的诊断价值[J]. 实验与检验医学，2010，28(6)：537-538.
[13] 闫伯强，胡天勇，杨宜平. 联合检测肿瘤坏死因子和抗结核杆菌抗体对结核病的临床意义[J]. 细胞与分子学免疫学杂志，2005，21(5)：182.
[14] 余春开，冯瑞娥. 结核分子生物学诊断技术的研究进展[J]. 中华肺部疾病杂志，2011，4(4)：324-329.
(收稿日期：2012-09-14 本文编辑：郭静娟), 百拇医药(凌显桢 罗建文)