血浆中microRNA—122表达量与肝癌手术前后肝损伤的相关性(1)
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[摘要] 目的 研究血浆中micro RNA-122(miR-122)的表达量与肝癌手术前后肝损伤的相关性。 方法 利用荧光定量检测30名健康人与30例肝癌患者的术前miR-122及丙氨酸氨基转移酶(ALT)的表达量，并进行比较，且检测30例肝癌患者的术前，术后第1、3、7天的血浆中miR-122及ALT，探讨miR-122与ALT的相关性。 结果 术前肝癌患者血浆中miR-122以及ALT的表达量均显著高于健康人群(P < 0.05)。患者术前，术后第1、3、7天血浆中的miR-122均与ALT呈正相关。 结论 血浆miR-122与肝切除术肝功能损伤相关，有望成为肝癌肝切除术前后肝功能损伤的检测指标。
[关键词] 肝肿瘤；肝切除术；micro RNA-122；肝损伤
[中图分类号] R446 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)01(b)-0098-02
肝癌为发病率及死亡率均很高的肝脏恶性肿瘤，每年约新发病例56万人，而死亡人数达60余万。微小RNA(micro RNA) 为一族非编码RNA，它在细胞的生命活动中发挥着极为重要的作用[1]。micro RNA参与调控细胞的增殖发育、分化和凋亡等，且与肿瘤的发生、发展相关。miR-122被普遍认为是成人肝脏中表达量最高的一种micro RNA。本研究旨在研究血浆中miR-122表达量与肝癌手术前后肝损伤的相关性，现报道如下：
1 资料与方法
1.1 一般资料
选取本院2011年6月～2012年6月的30例肝细胞癌住院患者，所有患者术前均未进行任何治疗，且均接受肝癌根治性切除手术，术后病理报告确诊为肝细胞癌，收集患者术前，术后第1、3、7天的外周血。并选择同期的30名健康人作为对照，同时收集对照组的外周血。
1.2 实验方法
1.2.1 miR-122表达量测定 (1)血浆处理及提取外周静脉血：离心吸取上层血浆2 mL，取其中的100 μL，依据异丙醇沉淀法提取步骤离心后加入ddH20进行溶解；(2)逆转录：按第一链合成试剂盒公司的说明书步骤进行；(3)荧光定量PCR：荧光定量PCR条件：94℃预变性2 min，后以94℃ 20 s，60℃ 34 s，60℃ 34 s进行40个循环反应；(4)测定：采用相对定量方法测定micro RNA-122的表达量。
1.2.2 ALT活性测定 从健康人及患者的外周血中分离出血浆样本，做ALT酶活性检测，使用Olympus AU1000全自动生化检测仪。
1.3 统计学分析
采用SPSS 17.0进行统计学分析，实验结果用均数±标准差表示，计数资料采用t检验，两变量的相关性采用双变量线性回归分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 miR-122在健康患者及肝癌患者组织的术前表达差异
miR-122和ALT在肝癌患者术前的表达均显著高于健康人，差异有统计学意义(P < 0.05)，见表1。
2.2 手术前后肝癌患者血浆中miR-122表达量和ALT的相关性分析
肝癌患者血浆术前，术后第1、3、7天miR-122表达量和ALT呈正相关(P < 0.05)，具体见表2。
3 讨论
肝癌属于发病率及死亡率均很高的肝脏恶性肿瘤。目前，最有效的治疗手段为肝切除及选择性的肝移植，但适应证有限，因此，肝癌患者的5年生存率低于5%，且预后很差。近年来，基因的异常表达在肝癌发生中的作用越来越受到重视，而基因芯片技术的发展使人们发现了大量在肝癌中差异表达的基因。
micro RNA为长度为21～25 核苷酸的单链RNA小分子片段，不编码蛋白质，它可以调控基因表达。micro RNA的主要作用机制为作为基因表达的负调控因子，通过与靶mi RNA的3′非翻译区(UTR)不完全互补结合，导致相应靶mRNA的降解或翻译抑制效应[2-3]。大量研究显示，mi RNA与肿瘤的发生均存在着密切关系。许多的实验以及临床研究也提出mi RNAs可能为一组新的致癌基因或抑癌基因[4-5]。有研究[6]提示肝癌术后早期复发组中有mi RNA表达的显著上调及下调。有学者利用芯片技术对肝癌组织(HCC)、肝癌周边正常组织(NT)及慢性肝炎(CH)细针穿刺肝组织的mi RNA表达谱进行分析，发现HCC与NT间表达有差异的mi RNA有30个(P < 0.01)，显示mi RNA与肝癌及肝脏的慢性损伤均相关。而在肝脏总mi RNAs分子中，72%为miR-122。
对于肝癌，有人对相同患者的肝癌组织和正常肝组织中的miR-122表达进行检测后发现，miR-122在同一患者肝癌组织中的表达水平明显低于正常肝组织。miR-122在肝癌和癌旁肝硬化组织中的表达水平与细胞周期蛋白G1呈现负相关，序列分析证实了G1是miR-122的靶点。G1已经被证实在多种恶性肿瘤中表达水平升高，起到促进肿瘤细胞生长增殖，抑制肿瘤细胞凋亡功能。因此推测对miR-122的表达进行干预可能可以起到治疗肝癌功能。本次研究也发现 ......
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