HPLC法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量
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[摘要] 目的 用高效液相色谱法测定复方穿心莲片中脱水穿心莲内酯的含量。 方法 采用Dia-monsil C18柱(200 mm×4.6 mm，5 μm)，以甲醇-水((52∶48)为流动相；流速：1.0 mL/min；检测波长：250 nm。 结果 脱水穿心莲内酯的线性范围为0.036～0.328 μg，r = 0.999 8；本品平均回收率为100.04%，RSD值为0.11%。 结论 本法简便、灵敏、准确。
[关键词] 高效液相色谱法；复方穿心莲片；脱水穿心莲内酯；含量测定
[中图分类号] R927.2 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2013)01(c)-0062-02
复方穿心莲片是以穿心莲、路边青药材制成的内服制剂，具有清热解毒、凉血、利湿的功效，用于风热感冒、喉痹等疾病[1]。本文采用HPLC法对制剂中的有效成分脱水穿心莲内酯进行含量测定，所建立的方法准确可靠、专属性强、稳定，可用于该制剂的质量控制。现报道如下：
1 仪器与试药
仪器：Agilent LC-1260高效液相色谱议(美国)、Agilent LC-1200DAD检测器；AD204-S电子天平；KQ-300DE超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)。复方穿心莲片样品(广州白云山和记黄埔中药有限公司，批号：C1D001、C1D002、C1D003)，甲醇(色谱纯，天津市大茂化学试剂厂)；水为纯净水；脱水穿心莲内酯对照品(中国药品生物制品检定所，批号：110854～200306)；
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：Dia-monsil C18(200 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相：甲醇-水(52∶48)；流速：1.0 mL/min；柱温：25℃；检测波长为250 nm。进样量10 μL，理论塔板数按脱水穿心莲内酯峰计，应不低于2 500[2-4]。
2.2 溶液制备
2.2.1 对照品溶液的制备 取脱水穿心莲内酯适量，精密称定，加甲醇制成每1 毫升含20 μg的溶液，摇匀，即得。
2.2.2 供试品溶液的制备 取本品细粉约0.5 g，精密称定，置50 mL量瓶中，加入甲醇约45 mL，超声处理30 min，取出，放冷，用甲醇定容至刻度，滤过，取续滤液，即得。
2.2.3 阴性对照溶液的制备 按处方比例，取缺穿心莲的其他各味药材，按供试品制备方法制成阴性对照溶液。
2.3 干扰试验
取脱水穿心莲内酯对照品溶液、供试品溶液及缺穿心莲药材的阴性对照溶液各10 μL注入液相色谱仪，记录色谱。从图谱可以看出，在此色谱条件下，脱水穿心莲内酯峰与其他组分峰分离完全，在与脱水穿心莲内酯峰相同的保留时间处，阴性对照无干扰，见图1、2、3。
2.4 线性关系考察
精密称取脱水穿心莲内酯对照品11.40 mg，置50 mL量瓶中，加甲醇溶解并稀释至刻度，摇匀，再精密吸2 mL至25 mL容量瓶中，用甲醇溶液稀释至刻度，分别进样2、6、10、14、18 μL，测定峰面积，以脱水穿心莲内酯浓度(μg)为横坐标(X)，峰面积积分值(A)为纵坐标(Y)，计算脱水穿心莲内酯回归方程为：Y = 43.990X + 0.033 2，r = 0.999 8。结果表明，脱水穿心莲内酯在0.036～0.328 μg范围内线性关系良好。
2.5 精密度试验
精密吸取脱水穿心莲内酯[(对照品溶液(0.018 mg/mL]10 μL，注入高效液相色谱仪中，平行测定6份，平均峰面积为430.278，求出相对标准偏差，RSD = 0.90%，结果表明精密度良好。
2.6 稳定性试验
取本品(批号：C1D002)约0.5 g，研细，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，吸取供试品溶液，分别在0、4、8、16、24 h测定1次。平均峰面积为428.63。结果表明，RSD值为1.1%，供试品在24 h内基本稳定。
2.7 重复性试验
取6份本品(批号：C1D002)，每份约0.5 g，精密称定，按“2.2.2”项下方法制备供试品溶液，分别精密吸取供试品溶液各10 μL，测定脱水穿心莲内酯峰面积，结果显示，平均峰面积为420.640，平均含量为0.964 mg/片，RSD值为0.70%，表明重复性良好。
2.8 加样回收试验
取已知含量(3.419 mg/g)的本品(批号C1D002)5份，每份约为0.25 g，精密称定，分别精密加入脱水穿心莲内酯对照品(0.902 mg/mL)1 mL，按供试品溶液的制备方法操作，计算回收率。结果表明，本品的平均回收率为100.04%，RSD值为0.11%，见表1。
2.9 含量测定
取样品3批，按供试品溶液的制备方法制得供试品溶液，按“2.1”项下的色谱条件进行含量测定，结果表明，脱水穿心莲内酯的平均含量为0.868 mg/片，见表2。
3 讨论
3.1 提取时间的选择
在进行本研究前，笔者对提取时间进行了考察：分别取本品4份，每份约0.5 g，精密称定，置入50 mL量瓶中，加入甲醇约45 mL，分别超声提取20、30、40、50 min，放冷，用甲醇定容至刻度，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液[5]，按“2.1”项下的色谱条件进行含量测定，结果证明，超声提取30 min既能提取完全，故选择超声时间为30 min。
3.2 色谱条件优化
本研究过程中分别比较了甲醇-水(52∶48)、甲醇-0.1%磷酸溶液(52∶48)、乙睛-水(30∶70)等不同的流动相[6-8]，结果证明，以甲醇-水(52∶48)为流动相能使其他峰完全分离，因此选甲醇-水(52∶48)为流动相。
综上所述，复方穿心莲片中选择君药穿心莲药材中的脱水穿心莲内酯进行含量测定，本法准确、可靠、稳定 ......
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