2.1 α-葡萄糖苷酶抑制剂的固定化酶筛选模型

    卢大胜等[10]建立了α-葡萄糖苷酶抑制剂的固定化酶筛选模型。以高脱乙酰度壳聚糖为载体，以三羟甲基磷(THP)为交联剂，将α-葡萄糖苷酶的N端固定，装柱，模拟其在体内小肠壁上的情况。方法：直径0.5 cm、长5.5 cm的层析柱中，加入50 μl PNPG(0.116 mol/L)，待测样品，37℃水浴中反应10 min，用紫外分光光度计在400 nm波长处测定吸收度值。与游离酶相比较，固定化酶筛选模型上的酶由于N端被固定，其空间结构有所制约，从而使与底物的结合受到一定程度的限制，导致其在实验中的活力偏低，但这正是它模拟酶在小肠壁上的情况，所以实验中反映出来的数据更接近于体内。该固定化酶筛选模型可重复使用，适合高效、便利、快速的筛选α-葡萄糖苷酶抑制剂，还可直接在体外评价α-葡萄糖苷酶抑制剂的作用效果，研究一些已知能够治疗糖尿病的天然产物的作用机制。

    2.2 IMER-HPLC

    将酶固定到色谱填料上，用装柱的方式制成IMER，与高效液相系统及质谱系统联用，可以进行酶抑制剂混合物的快速筛选。该法将色谱系统的选择性、快速、无破坏性及重现性与IMER的特异性和灵敏性相结合，可以极大的增强检测的灵敏度 ......