小鼠局灶性脑缺血再灌注模型的建立与评价(2)
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1.3.3 模型制备参考唐颖馨等[6-7]的方法采用改良线栓法制作小鼠MCAO/R模型并做适当改进，将线栓自颈总动脉经颈内动脉插入MCAO起始部，但手术过程中仅分离结扎颈总动脉，不分离结扎颈外动脉或翼腭动脉，也无需分离颈内动脉。腹腔注射1%戊巴比妥钠0.2 ml/只麻醉小鼠后，仰卧固定，解剖显微镜下行颈部正中切口。镜下用显微镊分离左侧颈总动脉约4 mm至颈内动脉和颈外动脉分叉处并穿双线备用，期间注意避免牵拉损伤迷走神经。结扎颈总动脉近心端并用微动脉夹在颈总动脉分叉下方夹闭颈总动脉血流后，在距离颈总动脉分叉下方约3 mm处用显微剪剪开一小口，插入线栓并用预留丝线固定在颈总动脉上，固定松紧度以能推进线栓为宜。此时松开微动脉夹，将线栓缓慢沿颈总动脉插入颈内动脉，操作过程中注意栓线走行方向勿入颈外动脉或翼腭动脉。线栓插入深度距颈总动脉分叉约4 mm时，提示线栓接近颈内动脉入颅点；插入深度距颈总动脉分叉8~9 mm时，此时有轻微阻力感，提示线栓头端到达大脑中动脉起始部。扎紧丝线以固定线栓，缝合切口，注意术后保温，待动物苏醒后单独置于饲养笼中。缺血3 h后，小心拔出栓线并结扎颈总动脉残端，再灌注24 h。假手术组只分离和结扎左侧颈总动脉，不插入线栓，其余操作步骤同I/R模型组。
1.3.4 神经行为学评分所有实验小鼠在再灌注24 h后采用Bederson评分标准[8]进行神经行为学评分。0分：无神经功能缺损症状；1分：提尾时，右前肢屈曲；2分：右侧推阻力下降，伴前肢屈曲，无转圈行为；3分：同2分行为，同时伴自发性向右侧转圈；4分：没有自发活动。以神经行为学评分≥1分为模型成功标准。
1.3.5 TTC染色测定脑梗死比[9]神经行为学评分后，随机选择10只假手术组及神经行为学评分≥1分的10只I/R模型小鼠，断头取脑，置-20℃冰箱中冷冻20 min。去除嗅脑、小脑及脑干，沿脑前级和视交叉中点、视交叉、漏斗部作冠状切片，共4片。用0.5%TTC 溶液37℃孵育脑片10 min后，滤纸吸取表面液体后，分离各脑片白色区(梗死区)和红色区(正常区)后分别称重，按下式计算脑梗死比：脑梗死比(%)=(梗死区重量-脑片总重量)/脑片总重量×100% ......
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