USP22 ShRNA慢病毒载体的构建及鉴定
http://www.100md.com
2014年11月15日
 |
| 第1页 |
参见附件。
余宏伟 廖志伟 庄雅靖 喻芳 周同冲 广州医科大学附属肿瘤医院放疗二科;
【摘要】目的构建并鉴定USP22基因Sh RNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因在鼻咽癌中的作用机制奠定基础。方法针对USP22基因的编码序列设计并合成2条特异性干扰序列,序列两端含有限制性内切酶位点HpaⅠ和XhoⅠ。寡核苷酸链退火生成寡核苷酸双链,5′端磷酸化后将含有酶切位点的寡核苷酸双链克隆到p LL3.7慢病毒表达载体。连接产物经转化、培养,提取其质粒,提取出来的质粒经HpaⅠ和XhoⅠ酶切电泳鉴定,鉴定正确的质粒进行测序。构建成功的慢病毒表达载体p LL-USP22-sh RNA与包装载体质粒混匀共转染于293T细胞。通过荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(GFP)情况,对病毒滴度和感染效率进行检测。结果成功构建慢病毒表达载体p LL-USP22-sh RNA。与包装载体质粒共转染293T细胞后测定慢病毒滴度为4×107 TU/ml。结论本实验应用相关技术成功构建USP22 Sh RNA慢病毒载体,为进一步研究USP22基因的生物学功能奠定了基础。
【关键词】 USP 慢病毒载体 构建 鉴定
【基金】广州医科大学附属肿瘤医院重大专项(2011-yz-06) 广州医科大学青年项目(2012A15)
【分类号】R373
肿瘤细胞中基因表达具有组织特异性,USP22泛素水解酶属去泛素化酶DUB基因家族成员,其普遍表达表明其功能的保守性,因此,USP22被归类为肿瘤干细胞的标记基因而引起高度关注[1]。国内外学者研究发现,USP22基因过表达与结直肠癌[2]、肺癌[3]、胃癌[4]、食管癌[5]、乳腺癌[6]等恶
------
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件(5128kb)。