1.8 Taq Man探针法荧光定量PCR检测大鼠血管中MGP mRNA的转录水平

    按Trizol RNA提取试剂盒说明书步骤提取组织总RAN，用核酸分析仪测定RNA浓度和纯度，OD260/280为1.8～2.0。立即反转录合成cDNA：取2 μl RNA样本，反应体系20 μl，反应条件：37℃ 15 min，85℃ 5s，1个循环。取2 μl cDNA模板进行目的基因MGP和内参基因GAPDH的PCR扩增。引物及探针均由上海机康生物技术有限公司设计合成。MGP引物序列：上游引物3′-GCATCTAGTCCCGCATCGC-5′，下游引物3′-CAATGCCTCAGACCAAAGTATAAGG-5′，探针序列：3′-(Eclipse)GACTTCATCGCCAACATCCGCCGCA-5′(FAM)；GAPDH序列：上游引物 3′-TCAGTATGACCTTGTACATCTGGT-5′，下游引物3′-CTCTAGGGCGATTGTAGTTTACC-5′。探针序列：3′-(Eclipse)TGA-CACGGCAACTTGAACGGCACC-5′(FAM) ......