咳喘颗粒HPLC指纹图谱研究(1)
x[摘要] 目的 建立咳喘颗粒的HPLC指纹图谱方法，为科学地评价咳喘颗粒的质量提供依据。 方法 Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18色谱柱(250 mm×4.6 mm，5 μm)以乙腈-0.1%磷酸水为流动相梯度洗脱，检测波长237 nm，流速1.0 ml/min，柱温：30℃。 结果 确定了16个共有峰，10批咳喘颗粒指纹图谱的相似度均>0.96。 结论 建立了分离效果好、简单、灵敏、准确的方法，可用于咳喘颗粒质量评价的方法。
[关键词] 咳喘颗粒；高效液相色谱；指纹图谱；相似度
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2015)02(a)-0008-04
Study on HPLC fingerprint of Kechuan granules
LIU De-xian1，2 TAO Zun-wei2 ZHANG Ting2 ZHANG Yan2
1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300073，China；2.Tianjin Institute of Medical Pharmaceutical Sciences，Tianjin 300020，China
[Abstract] Objective To establish HPLC fingerprint of Kechuan granules for the quality control of its scientifically.Methods Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 column (250 mm×4.6 mm，5 μm)；acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous solution was used as the mobile phase for the gradient elution；the wavelength was set at 237 nm；the mobile phase at 30℃；the velocity of 1.0 ml/min to record the HPLC chromatograms of ten batches of samples. Results Sixteen common peaks were confirmed and similarity of 10 batches of Kechuan granules was more than 0.96. Conclusion The established method is sensitive，accurate and simple，and it can be used specifically for the quality control of Kechuan granules.
[Key words] Kechuan granules；HPLC；Fingerprint；Similarity
咳喘颗粒为院内制剂，由五味子、白芍、甘草、黄芩等14味中药组成，具有解表散寒、温肺化饮之功效，治疗咳嗽、哮喘效果显著，未见相关的指纹图谱报道。中药复方作用特点相辅相成，即多成分、多系统、多靶点的综合效应[1-3]，因此用单一指标成分往往不能达到全面评价和控制复方制剂质量的效果，而指纹图谱由于其具有多指标全面分析的作用[4-5]，已成为评价中药质量的有效方法，并被广泛用于中药及其复方制剂的质量控制研究[6-10]。因此，为了更好地控制咳喘颗粒质量，为临床用药提供依据，本实验采用HPLC方法[11-12]建立咳喘颗粒的化学指纹图谱，着重表达药材的信息。对咳喘颗粒指纹图谱中主要指纹峰进行归属，实现系统、多角度控制咳喘颗粒质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪(LC-20AT日本岛津公司)，PDA检测器；超声仪(KQ-250B，昆山市超声仪器有限公司)；电子分析天平(ABS135-S，瑞士梅特勒-托利多公司)；电子天平(JJ200，常熟双杰测试仪器厂 )。
1.2 试药
芍药苷对照品(批号：1110736-200934，由中国食品药品检定研究院提供)、甘草苷对照品(批号：11610-201106)、黄芩苷对照品(批号110715-201117)、甘草酸铵对照品(110731-200615)、五味子醇甲对照品(110857-201211)，以上五种对照品均由中国药品生物制品检定所提供)；乙腈(色谱纯，迪马科技有限公司)，甲醇(色谱纯，迪马科技有限公司)，甲醇(分析纯，天津市化学试剂批发公司)，乙醇(分析纯，天津市化学试剂批发公司)，娃哈哈纯净水(天津娃哈哈宏振饮料有限公司)，咳喘颗粒(批号：tl20140507001～tl20140507010，医内制剂)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0～20 min，10%～15%A；20～30 min，15%～30%A；30～50 min，30%～50%A；50～90 min，50%～90%A；90～100 min，90%～100%A；检测波长237 nm，流速1.0 ml/min，分析时间75 min，进样量10 μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷、甘草苷、黄芩苷、甘草酸铵、五味子醇甲对照品适量，加甲醇溶解并定容，制成质量浓度分别为0.05、0.1、0.04、0.085、0.18 mg/ml的混合对照品溶液，即得。 (刘德贤扥)
[关键词] 咳喘颗粒；高效液相色谱；指纹图谱；相似度
[中图分类号] R284.1 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2015)02(a)-0008-04
Study on HPLC fingerprint of Kechuan granules
LIU De-xian1，2 TAO Zun-wei2 ZHANG Ting2 ZHANG Yan2
1.Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300073，China；2.Tianjin Institute of Medical Pharmaceutical Sciences，Tianjin 300020，China
[Abstract] Objective To establish HPLC fingerprint of Kechuan granules for the quality control of its scientifically.Methods Agilent ZORBAX Eclipse XDB-C18 column (250 mm×4.6 mm，5 μm)；acetonitrile-0.1% phosphoric acid aqueous solution was used as the mobile phase for the gradient elution；the wavelength was set at 237 nm；the mobile phase at 30℃；the velocity of 1.0 ml/min to record the HPLC chromatograms of ten batches of samples. Results Sixteen common peaks were confirmed and similarity of 10 batches of Kechuan granules was more than 0.96. Conclusion The established method is sensitive，accurate and simple，and it can be used specifically for the quality control of Kechuan granules.
[Key words] Kechuan granules；HPLC；Fingerprint；Similarity
咳喘颗粒为院内制剂，由五味子、白芍、甘草、黄芩等14味中药组成，具有解表散寒、温肺化饮之功效，治疗咳嗽、哮喘效果显著，未见相关的指纹图谱报道。中药复方作用特点相辅相成，即多成分、多系统、多靶点的综合效应[1-3]，因此用单一指标成分往往不能达到全面评价和控制复方制剂质量的效果，而指纹图谱由于其具有多指标全面分析的作用[4-5]，已成为评价中药质量的有效方法，并被广泛用于中药及其复方制剂的质量控制研究[6-10]。因此，为了更好地控制咳喘颗粒质量，为临床用药提供依据，本实验采用HPLC方法[11-12]建立咳喘颗粒的化学指纹图谱，着重表达药材的信息。对咳喘颗粒指纹图谱中主要指纹峰进行归属，实现系统、多角度控制咳喘颗粒质量。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪(LC-20AT日本岛津公司)，PDA检测器；超声仪(KQ-250B，昆山市超声仪器有限公司)；电子分析天平(ABS135-S，瑞士梅特勒-托利多公司)；电子天平(JJ200，常熟双杰测试仪器厂 )。
1.2 试药
芍药苷对照品(批号：1110736-200934，由中国食品药品检定研究院提供)、甘草苷对照品(批号：11610-201106)、黄芩苷对照品(批号110715-201117)、甘草酸铵对照品(110731-200615)、五味子醇甲对照品(110857-201211)，以上五种对照品均由中国药品生物制品检定所提供)；乙腈(色谱纯，迪马科技有限公司)，甲醇(色谱纯，迪马科技有限公司)，甲醇(分析纯，天津市化学试剂批发公司)，乙醇(分析纯，天津市化学试剂批发公司)，娃哈哈纯净水(天津娃哈哈宏振饮料有限公司)，咳喘颗粒(批号：tl20140507001～tl20140507010，医内制剂)。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱：C18(250 mm×4.6 mm，5 μm)；流动相A为乙腈，流动相B为0.1%磷酸溶液，梯度洗脱：0～20 min，10%～15%A；20～30 min，15%～30%A；30～50 min，30%～50%A；50～90 min，50%～90%A；90～100 min，90%～100%A；检测波长237 nm，流速1.0 ml/min，分析时间75 min，进样量10 μl。
2.2 对照品溶液的制备
精密称取芍药苷、甘草苷、黄芩苷、甘草酸铵、五味子醇甲对照品适量，加甲醇溶解并定容，制成质量浓度分别为0.05、0.1、0.04、0.085、0.18 mg/ml的混合对照品溶液，即得。 (刘德贤扥)