不同纯度的有机溶剂对2株肿瘤细胞的抑制作用(1)
[摘要] 目的 给脂溶性的抗肿瘤药物筛选高溶解性、低细胞毒性的有机溶剂。 方法 采用MTT法，按照不同纯度，对8种能溶于水的有机溶剂，测试其对黑色素瘤B16、人胃癌细胞SGC-7901两种细胞株的细胞毒性。 结果 不同有机溶剂对不同细胞株的抑制皆不同，甲醇与丙酮对两种细胞株的毒性相对都较弱，纯度越高的有机溶剂对细胞毒害越小。 结论 光谱纯的甲醇与丙酮是脂溶性抗肿瘤药物有效的有机溶剂。
[关键词] MTT；细胞毒性；有机溶剂；纯度
[中图分类号] R915 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2015)02(b)-0144-03
Inhibitory effect of different purity organic solvents on two tumor cells
ZHOU Song-lin LIN Ying-ying ZHAO Huan-ge HUANG Yong-hao
, http://www.100md.com
Key Laboratory of Tropical Medicine，Hainan Medical College，Haikou 571199，China
[Abstract] Objective To select organic solvents with low cytotoxicity for dissolve some compounds which had bad water-solubility in screening antitumor agent compound. Methods The cytotoxic effect of 8 organic solvents both can dissolve in water and fat soluble organic solvents with different purity on two tumor cell lines(B16 and SGC-7901)were tested by MTT. Results Different organic solvents inhibit different cell lines were different，the effect of methanol and acetone toxicity on two kinds of cell lines were relatively weak.The higher the purity of the organic solvent on two tumor cell had low toxicity. Conclusion The spectrum class pure methanol and acetone are effective organic solvent of fat-soluble anticancer drugs.
, 百拇医药
[Key words] MTT；Cytotoxicity；Organic solvents；Purity
在体外筛选抗肿瘤药物时，常碰到被筛选的药物不能溶于细胞培养液中，这需要借助有机溶剂才能溶解，因此，溶解样品的有机溶剂既要能较好地溶解药品，使之溶于培养液中，又需要在一定的浓度范围内对供试细胞株毒性尽可能小。这样低细胞毒害的溶剂才不会对药物的抗肿瘤作用产生假阳性。虽然有不少文献报道不同的溶剂对不同的细胞毒害都不一样[1-5]，但这些文献很少涉及不同纯度有机溶剂对细胞毒害的作用，且不少文献涉及有些不溶于水的有机溶剂，因此，本文通过比较几种常见溶于水的分析纯和光谱纯的有机溶剂，来测试对2株常见的细胞黑色素瘤B16和人胃癌细胞SGC-7901的毒害作用。
1 材料与方法
1.1 肿瘤细胞系
黑色素瘤细胞B16、人胃癌细胞SGC-7901，从中国科学院上海药物研究所肿瘤细胞库引进，并在本室长期传代培养。
, http://www.100md.com
1.2 试剂与药物
RPMI-1640培养基，Gibco公司；MTT，Sigma公司；新生小牛血清，杭州四季青公司；甲醇、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、丙酮、乙醇、甘油、异丙醇、分析纯(analytical pure，AR)的为国产分析纯，光谱纯(spectrum pure，SP)购自美国天地公司；二氧化碳培养箱，Heroes公司；酶标仪，美国Biotech公司。
1.3 细胞毒试验
采用MTT法进行测试[6-7]，取对数生长期的B16、SGC-7901细胞株，调整细胞浓度为5×103/ml，加入96孔板中，180 μl/孔。细胞在培养箱中放置4 h待贴壁后再加待测溶剂，每孔分别加入不同体积的溶剂(1.0、2.0、5、10、15、20 μl)，然后再加入细胞培养也补齐200 μl/孔的体积，阴性对照为等体积的细胞培养液，37 ℃、5% CO2培养箱中孵育36 h后，分别加入MTT 5 mg/ml，20 μl/孔，继续培养4 h后，轻轻吸去上层清液，再向每孔加入150 μl DMSO溶解蓝紫结晶甲瓒，用酶标仪在540 nm波长下测定各孔的OD值，实验重复3次。
, 百拇医药
2 结果
2.1 有机溶剂对B16细胞增殖的抑制率
8种不同纯度的有机溶剂对B16的毒害作用见表1，其中光谱纯的丙酮对B16的伤害最小，IC50的抑制体积分数为11.05%，其次是光谱纯的甲醇，毒性最大的是分析纯DMSO。当溶剂的体积分数为5.0%时，甲醇、丙酮对细胞的均无明显毒害作用。
表1 不同有机溶剂对黑色素瘤B16的毒害作用(%)
“-”表示无明显抑制
2.2 有机溶剂对SGC-7901细胞增殖的抑制率, http://www.100md.com(周松林等)
[关键词] MTT；细胞毒性；有机溶剂；纯度
[中图分类号] R915 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2015)02(b)-0144-03
Inhibitory effect of different purity organic solvents on two tumor cells
ZHOU Song-lin LIN Ying-ying ZHAO Huan-ge HUANG Yong-hao
, http://www.100md.com
Key Laboratory of Tropical Medicine，Hainan Medical College，Haikou 571199，China
[Abstract] Objective To select organic solvents with low cytotoxicity for dissolve some compounds which had bad water-solubility in screening antitumor agent compound. Methods The cytotoxic effect of 8 organic solvents both can dissolve in water and fat soluble organic solvents with different purity on two tumor cell lines(B16 and SGC-7901)were tested by MTT. Results Different organic solvents inhibit different cell lines were different，the effect of methanol and acetone toxicity on two kinds of cell lines were relatively weak.The higher the purity of the organic solvent on two tumor cell had low toxicity. Conclusion The spectrum class pure methanol and acetone are effective organic solvent of fat-soluble anticancer drugs.
, 百拇医药
[Key words] MTT；Cytotoxicity；Organic solvents；Purity
在体外筛选抗肿瘤药物时，常碰到被筛选的药物不能溶于细胞培养液中，这需要借助有机溶剂才能溶解，因此，溶解样品的有机溶剂既要能较好地溶解药品，使之溶于培养液中，又需要在一定的浓度范围内对供试细胞株毒性尽可能小。这样低细胞毒害的溶剂才不会对药物的抗肿瘤作用产生假阳性。虽然有不少文献报道不同的溶剂对不同的细胞毒害都不一样[1-5]，但这些文献很少涉及不同纯度有机溶剂对细胞毒害的作用，且不少文献涉及有些不溶于水的有机溶剂，因此，本文通过比较几种常见溶于水的分析纯和光谱纯的有机溶剂，来测试对2株常见的细胞黑色素瘤B16和人胃癌细胞SGC-7901的毒害作用。
1 材料与方法
1.1 肿瘤细胞系
黑色素瘤细胞B16、人胃癌细胞SGC-7901，从中国科学院上海药物研究所肿瘤细胞库引进，并在本室长期传代培养。
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1.2 试剂与药物
RPMI-1640培养基，Gibco公司；MTT，Sigma公司；新生小牛血清，杭州四季青公司；甲醇、乙腈、四氢呋喃(THF)、二甲亚砜(DMSO)、丙酮、乙醇、甘油、异丙醇、分析纯(analytical pure，AR)的为国产分析纯，光谱纯(spectrum pure，SP)购自美国天地公司；二氧化碳培养箱，Heroes公司；酶标仪，美国Biotech公司。
1.3 细胞毒试验
采用MTT法进行测试[6-7]，取对数生长期的B16、SGC-7901细胞株，调整细胞浓度为5×103/ml，加入96孔板中，180 μl/孔。细胞在培养箱中放置4 h待贴壁后再加待测溶剂，每孔分别加入不同体积的溶剂(1.0、2.0、5、10、15、20 μl)，然后再加入细胞培养也补齐200 μl/孔的体积，阴性对照为等体积的细胞培养液，37 ℃、5% CO2培养箱中孵育36 h后，分别加入MTT 5 mg/ml，20 μl/孔，继续培养4 h后，轻轻吸去上层清液，再向每孔加入150 μl DMSO溶解蓝紫结晶甲瓒，用酶标仪在540 nm波长下测定各孔的OD值，实验重复3次。
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2 结果
2.1 有机溶剂对B16细胞增殖的抑制率
8种不同纯度的有机溶剂对B16的毒害作用见表1，其中光谱纯的丙酮对B16的伤害最小，IC50的抑制体积分数为11.05%，其次是光谱纯的甲醇，毒性最大的是分析纯DMSO。当溶剂的体积分数为5.0%时，甲醇、丙酮对细胞的均无明显毒害作用。
表1 不同有机溶剂对黑色素瘤B16的毒害作用(%)
“-”表示无明显抑制
2.2 有机溶剂对SGC-7901细胞增殖的抑制率, http://www.100md.com(周松林等)