线粒体DNA缺失突变对顺铂耳毒易感作用的影响(2)
1.4 ABR的检测实验组和对照组所有大鼠在注射DOX或生理盐水前以及顺铂前后各测1次ABR,所有测试在隔音屏蔽室内进行。先将大鼠2%戊巴比妥钠(40 mg/kg)腹腔注射麻醉后,固定安插针式电极,其中记录电极置于颅顶,参考电极和接地电极分别置于同侧和对侧乳突部。采用YJC-A型诱发电位仪进行检测:用短声刺激,声源距耳1 cm,频率10次/s,放大器增益4000倍,通频带为80~3000 Hz,叠加200次,结果以波群中Ⅲ波消失或Ⅳ波刚出现时的短声刺激强度的分贝(dB)值为反应阈值。分别记录各组动物ABR阈值变化情况。
1.5 内耳膜迷路mtDNA的提取及PCR扩增
大鼠在3.5%水合氯醛腹腔注射麻醉下,迅速断头,取出两侧听泡,快速置于预冷4℃的充氧细胞外液中(0.1 mol/L PBS,pH 7.4)。在体视显微镜下解剖出Corti器和蜗轴、椭圆囊、球囊及壶腹嵴等结构。每只动物两侧内耳相同组织合在一起,置入EP管中加TE缓冲液200 μl匀浆后加入细胞裂解液 ......
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