针刺不同穴组对慢性疲劳综合征小鼠行为及抗氧化能力的影响(1)
[摘要]目的 比较针刺不同穴组对慢性疲劳综合征(CFS)小鼠的治疗作用。方法 雄性昆明小鼠60只，适应性饲养3 d后随机分为正常组、模型组、“合谷、太冲”组、“合谷、太冲、三阴交”组、“合谷、太冲、足三里”组，每组12只。采用慢性束缚+力竭游泳复合因素建立CFS模型，共12 d。治疗7 d后观察各组小鼠行为学改变，检测血清抗氧化指标。结果 ①模型组与正常组比较，悬尾不动时间延长，水平运动、垂直运动得分减少，血清丙二醛(MDA)含量增加、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性下降，差异有统计学意义(P<0.01)。②各针刺组与模型组比较，悬尾不动时间缩短，水平运动、垂直运动得分增加，血清MDA含量减少，SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义(P<0.05)，其中“合谷、太冲、足三里”组改善最为显著(P<0.01)。③“合谷、太冲、足三里”组与其余两针刺组比较，血清MDA含量减少、SOD及GSH-PX活性升高，差异有统计学意义(P<0.05)。结论 针刺各组腧穴均能对CFS小鼠起到明显的治疗作用，其中“合谷、太冲、足三里”穴组治疗效果最佳，其配伍作用更符合CFS的基本病机。
[关键词]针刺疗法；穴组；慢性疲劳综合征；抗氧化
[中图分类号] R245.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2016)09(a)-0012-04
慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome，CFS)是以持续或反复发作的严重疲劳为主要表现的一组证候群[1]。由于该病的临床表现及发病机制复杂，相对于西医学疗法，针灸可从整体上调节机体功能，在CFS治疗中具有明显优势。从目前针灸治疗CFS的研究现况来看[2-3]，大多数研究重点主要集中于针灸的起效机制和不同针灸疗法的疗效比较，缺少针对CFS基本病机的组穴研究。本实验选用对CFS具有较好治疗作用、符合CFS基本病机的“合谷、太冲”[4]为基础穴组，再配以CFS临床治疗中常用的“三阴交”或“足三里”[5]组成新的穴组，观察针刺各穴组对CFS小鼠的治疗效果，比较各穴组的作用差异，分析其配伍作用。
1材料与方法
1.1实验动物及分组
清洁级健康雄性昆明小鼠60只，4～6周龄，体重18～22 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(辽)2013-0003。饲养环境温度(24±1)℃，相对湿度(50±10)%，小鼠可自由饮水及进食。适应性饲养3 d后，按照完全随机原则将小鼠分为5组：正常组、模型组、“合谷、太冲”组、“合谷、太冲、三阴交”组、“合谷、太冲、足三里”组，每组12只。实验过程遵守国家科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.2主要器材及试剂
小鼠游泳池(长60 cm×宽50 cm×高35 cm)；束缚筒(根据有关文献自制[6]，采用50 ml医用注射器改装，筒壁周围用锯条锯出多条宽1 mm的通气缝隙)；针灸针(0.16×7 mm，北京中研太和医疗器械有限公司)；小鼠束鼠器(北京翼诺泰科技发展有限公司)；悬尾实验架(根据有关文献自制[7-8]，将一木制横梁水平放置，两端固定，横梁距离平面30 cm，四周封闭以阻挡小鼠视线，顶端开放以利于实验观察)；小鼠旷场实验箱(根据有关文献自制[9]，长50 cm×宽50 cm×高40 cm，无上盖，内壁黑色，底面平分为25个方格)；数码摄像机(日本佳能公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3造模方法
采用慢性束缚+力竭游泳复合因素建立CFS动物模型[10]，造模因素每日施加1次，共12 d。上午束缚：将小鼠放入自制束缚筒内，用注射器活塞调节筒内空间大小，以小鼠呼吸不受限制又能产生束缚效果为度，束缚时间每3天循序加量1次，分别为1、1.5、2、2.5 h。下午游泳训练：将小鼠放入水温(26±2)℃的游泳池中进行游泳训练，水深30 cm，前3 d为适应性游泳，30 min/d，其后为力竭性游泳，以鼻尖沉入水中8 s不能浮出水面为力竭标准[11]。正常组不予造模，正常喂养。
1.4针刺方法
造模完成后，将小鼠固定于束鼠器内，各针刺组分别针刺“合谷、太冲”穴，“合谷、太冲、三阴交”穴，“合谷、太冲、足三里”穴，参照《实验针灸学》[12]定位相应腧穴，双侧取穴，留针10 min，其间行针1次，施以平补平泻捻转手法，手法操作2 min，1次/d，共7 d。正常组与模型组仅给予相同时间和相同方式的固定，不予针刺。
1.5行为学观察指标
各组小鼠治疗后进行以下行为学测试。
1.5.1悬尾实验 将鼠尾末端1 cm的部分用医用输液胶布固定在悬尾实验架的木质横梁上，使小鼠呈倒悬状态，用摄相机记录小鼠5 min内的活动状态[7]，统计悬尾不动时间。
1.5.2旷场实验 将小鼠放入旷场实验箱底面的中央格内，以四只爪子进入一格记为水平运动1分，两只前爪腾空或攀附箱壁记为垂直运动1分，用摄像机记录5 min内的小鼠行为状况，统计运动得分[9]。
1.6血清抗氧化指标检测
行为学观察结束后，摘小鼠眼球取血，分离取上层血清，置于-20°冰箱保存备测。严格按照试剂盒说明检测血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性。
1.7统计学方法
采用SPSS 17.0软件对数据进行分析，符合正态分布的计量数据以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析进行组间比较，用LSD和SNK法进行两两比较，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1实验过程中动物死亡情况 (翟恒 张宝文 苑迅)
[关键词]针刺疗法；穴组；慢性疲劳综合征；抗氧化
[中图分类号] R245.9 [文献标识码] A [文章编号] 1674-4721(2016)09(a)-0012-04
慢性疲劳综合征(chronic fatigue syndrome，CFS)是以持续或反复发作的严重疲劳为主要表现的一组证候群[1]。由于该病的临床表现及发病机制复杂，相对于西医学疗法，针灸可从整体上调节机体功能，在CFS治疗中具有明显优势。从目前针灸治疗CFS的研究现况来看[2-3]，大多数研究重点主要集中于针灸的起效机制和不同针灸疗法的疗效比较，缺少针对CFS基本病机的组穴研究。本实验选用对CFS具有较好治疗作用、符合CFS基本病机的“合谷、太冲”[4]为基础穴组，再配以CFS临床治疗中常用的“三阴交”或“足三里”[5]组成新的穴组，观察针刺各穴组对CFS小鼠的治疗效果，比较各穴组的作用差异，分析其配伍作用。
1材料与方法
1.1实验动物及分组
清洁级健康雄性昆明小鼠60只，4～6周龄，体重18～22 g，由大连医科大学实验动物中心提供，许可证号：SCXK(辽)2013-0003。饲养环境温度(24±1)℃，相对湿度(50±10)%，小鼠可自由饮水及进食。适应性饲养3 d后，按照完全随机原则将小鼠分为5组：正常组、模型组、“合谷、太冲”组、“合谷、太冲、三阴交”组、“合谷、太冲、足三里”组，每组12只。实验过程遵守国家科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》。
1.2主要器材及试剂
小鼠游泳池(长60 cm×宽50 cm×高35 cm)；束缚筒(根据有关文献自制[6]，采用50 ml医用注射器改装，筒壁周围用锯条锯出多条宽1 mm的通气缝隙)；针灸针(0.16×7 mm，北京中研太和医疗器械有限公司)；小鼠束鼠器(北京翼诺泰科技发展有限公司)；悬尾实验架(根据有关文献自制[7-8]，将一木制横梁水平放置，两端固定，横梁距离平面30 cm，四周封闭以阻挡小鼠视线，顶端开放以利于实验观察)；小鼠旷场实验箱(根据有关文献自制[9]，长50 cm×宽50 cm×高40 cm，无上盖，内壁黑色，底面平分为25个方格)；数码摄像机(日本佳能公司)；丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)测定试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
1.3造模方法
采用慢性束缚+力竭游泳复合因素建立CFS动物模型[10]，造模因素每日施加1次，共12 d。上午束缚：将小鼠放入自制束缚筒内，用注射器活塞调节筒内空间大小，以小鼠呼吸不受限制又能产生束缚效果为度，束缚时间每3天循序加量1次，分别为1、1.5、2、2.5 h。下午游泳训练：将小鼠放入水温(26±2)℃的游泳池中进行游泳训练，水深30 cm，前3 d为适应性游泳，30 min/d，其后为力竭性游泳，以鼻尖沉入水中8 s不能浮出水面为力竭标准[11]。正常组不予造模，正常喂养。
1.4针刺方法
造模完成后，将小鼠固定于束鼠器内，各针刺组分别针刺“合谷、太冲”穴，“合谷、太冲、三阴交”穴，“合谷、太冲、足三里”穴，参照《实验针灸学》[12]定位相应腧穴，双侧取穴，留针10 min，其间行针1次，施以平补平泻捻转手法，手法操作2 min，1次/d，共7 d。正常组与模型组仅给予相同时间和相同方式的固定，不予针刺。
1.5行为学观察指标
各组小鼠治疗后进行以下行为学测试。
1.5.1悬尾实验 将鼠尾末端1 cm的部分用医用输液胶布固定在悬尾实验架的木质横梁上，使小鼠呈倒悬状态，用摄相机记录小鼠5 min内的活动状态[7]，统计悬尾不动时间。
1.5.2旷场实验 将小鼠放入旷场实验箱底面的中央格内，以四只爪子进入一格记为水平运动1分，两只前爪腾空或攀附箱壁记为垂直运动1分，用摄像机记录5 min内的小鼠行为状况，统计运动得分[9]。
1.6血清抗氧化指标检测
行为学观察结束后，摘小鼠眼球取血，分离取上层血清，置于-20°冰箱保存备测。严格按照试剂盒说明检测血清MDA含量及SOD、GSH-PX活性。
1.7统计学方法
采用SPSS 17.0软件对数据进行分析，符合正态分布的计量数据以均数±标准差(x±s)表示。采用单因素方差分析进行组间比较，用LSD和SNK法进行两两比较，以P<0.05为差异有统计学意义。
2结果
2.1实验过程中动物死亡情况 (翟恒 张宝文 苑迅)