稳表达人HSP72的人脐带间充质干细胞株的构建(2)
1.2方法
1.2.1 hUC-MSC的培养及鉴定 经产妇知情同意后，留取健康新生儿近脐端5～10 cm，小心剔除两条脐动脉，一条脐静脉，保留卡通式胶，剪碎至1 mm3，接种于培养瓶。待细胞自组织块爬出并融合至60%时，去除组织块继续培养，常规1∶2传代。取第三代hUC-MSC用荧光抗体标记和流式细胞仪检测的方法进行表面标志物的鉴定，并按说明书要求的步骤进行向骨、脂肪、软骨方向分化能力的诱导和鉴定。
1.2.2 目的基因调取 以MGC fully sequenced human HSPAIA cDNA为模板，设计两条引物，分别为序列5′-3′AT GAATTCATGGCCAAAGCCGCGGCGATC(含EcoRI酶切位点)和序列5′-3′AT GGATCC CTAATCCACCTCCTCAATGGTGGGG(含BamHI酶切位点)，引物序列送广州辉骏生物科技有限公司合成，做PCR调取目标片段HSP72并纯化回收。
1.2.3慢病毒载体的构建及包装 用EcoRI和BamHI酶切HSP72纯化产物和慢病毒表达载体 ......
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1.2.1 hUC-MSC的培养及鉴定 经产妇知情同意后，留取健康新生儿近脐端5～10 cm，小心剔除两条脐动脉，一条脐静脉，保留卡通式胶，剪碎至1 mm3，接种于培养瓶。待细胞自组织块爬出并融合至60%时，去除组织块继续培养，常规1∶2传代。取第三代hUC-MSC用荧光抗体标记和流式细胞仪检测的方法进行表面标志物的鉴定，并按说明书要求的步骤进行向骨、脂肪、软骨方向分化能力的诱导和鉴定。
1.2.2 目的基因调取 以MGC fully sequenced human HSPAIA cDNA为模板，设计两条引物，分别为序列5′-3′AT GAATTCATGGCCAAAGCCGCGGCGATC(含EcoRI酶切位点)和序列5′-3′AT GGATCC CTAATCCACCTCCTCAATGGTGGGG(含BamHI酶切位点)，引物序列送广州辉骏生物科技有限公司合成，做PCR调取目标片段HSP72并纯化回收。
1.2.3慢病毒载体的构建及包装 用EcoRI和BamHI酶切HSP72纯化产物和慢病毒表达载体 ......
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