利用36B4基因扩增效率评价PBMC基因组DNA的制备质量(2)
1.5实时定量PCR检测
PCR体系的组成：150 nmol/L 6-ROX，0.2×Sybr Green Ⅰ，15 nmol/L Tris-HCl(pH=8.0)，50 nmol/L KCl，2 mmol/L MgCl2，dNTP各0.2 mmol/L，5 mmol/L DTT，1% DMSO以及1.25 U GoTaq Gold DNA 多聚酶(Promega公司)[3]。基因组DNA模板40 ng，引物浓度0.5 μmol/L，反应体系体积20 μl。反应条件：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，58℃延伸1 min(35个循环)。标准曲线为一份抽提的基因组DNA按照梯度稀释，最高浓度42 ng，依次按照1.68倍等比稀释。
引物由生工生物工程上海有限公司合成，序列[4]如下：
36B4u，CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC；
36B4d，CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA。
2结果
2.1琼脂糖凝胶电泳较难分辨降解条带
经DNA酶(DNase Ⅰ)处理的基因组DNA很快被降解成小片段 ......
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PCR体系的组成：150 nmol/L 6-ROX，0.2×Sybr Green Ⅰ，15 nmol/L Tris-HCl(pH=8.0)，50 nmol/L KCl，2 mmol/L MgCl2，dNTP各0.2 mmol/L，5 mmol/L DTT，1% DMSO以及1.25 U GoTaq Gold DNA 多聚酶(Promega公司)[3]。基因组DNA模板40 ng，引物浓度0.5 μmol/L，反应体系体积20 μl。反应条件：95℃预变性10 min，95℃变性15 s，58℃延伸1 min(35个循环)。标准曲线为一份抽提的基因组DNA按照梯度稀释，最高浓度42 ng，依次按照1.68倍等比稀释。
引物由生工生物工程上海有限公司合成，序列[4]如下：
36B4u，CAGCAAGTGGGAAGGTGTAATCC；
36B4d，CCCATTCTATCATCAACGGGTACAA。
2结果
2.1琼脂糖凝胶电泳较难分辨降解条带
经DNA酶(DNase Ⅰ)处理的基因组DNA很快被降解成小片段 ......
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