低剂量脂多糖对哮喘小鼠T淋巴细胞产生IL—17的影响(2)
无菌状态下分别切除各组小鼠脾脏，剪碎过100目钢网，收集细胞混悬液，过T细胞尼龙毛柱，放置于37℃，5%CO2培养箱中孵育1 h，再用RPMI 1640冲洗尼龙毛柱，即得到分离、纯化的T细胞。流式细胞仪检测CD3，检测T细胞纯度。按实验要求重新调整T细胞浓度为1×106/ml。
1.5 LPS体外刺激T细胞
取24孔培养板，每孔加入哮喘小鼠脾脏来源的T细胞1×106/ml(共1 ml)，再分别加入终浓度为1、2 ng/ml的LPS生理盐水溶液，对照组以0.1 ml生理盐水替代加入。以上各组均设20个复孔。置培养板于5% CO2、37℃细胞培养箱中培养72 h后，取上清液测其IL-17水平。
1.6 ELISA法测定IL-17水平
按照说明书步骤进行。加100 μl标准对照、待测样品和空白对照(样品稀释液)到已包被好的培养板孔内，37℃孵育90 min；洗板，每孔加入50 μl抗体，混合30 s，37℃孵育60 min；洗板，每孔加入50 μl抗体 ......
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1.5 LPS体外刺激T细胞
取24孔培养板，每孔加入哮喘小鼠脾脏来源的T细胞1×106/ml(共1 ml)，再分别加入终浓度为1、2 ng/ml的LPS生理盐水溶液，对照组以0.1 ml生理盐水替代加入。以上各组均设20个复孔。置培养板于5% CO2、37℃细胞培养箱中培养72 h后，取上清液测其IL-17水平。
1.6 ELISA法测定IL-17水平
按照说明书步骤进行。加100 μl标准对照、待测样品和空白对照(样品稀释液)到已包被好的培养板孔内，37℃孵育90 min；洗板，每孔加入50 μl抗体，混合30 s，37℃孵育60 min；洗板，每孔加入50 μl抗体 ......
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