22q11.2微缺失伴先天性心脏病的诊断技术研究(2)
1.2 试剂与仪器
FISH诊断试剂盒(购自北京金菩嘉医疗科技有限公司)，胶原酶B、RNase A酶、胃蛋白酶(均购自美国Sigma公司)。国产长风恒温水浴箱、奥林巴斯BX51型荧光显微镜。
1.3 FISH检测
根据孕龄取羊水10 ml、脐血2 ml或绒毛3～4枝，采用FISH诊断试剂盒，对标本22号染色体TUPLE1基因的微缺失进行检测。GLP TUPLE1/GLP ARSA为待检测的基因，TUPLE1：22q 11和ARSA：22q 13为探针的位点，其荧光信号分别为桔红色和绿色，彼此互为内对照探针。严格按试剂盒说明进行操作，分别进行滴片、干燥、变性、杂交、后洗、染色和镜检等操作。如果TUPLEl探针与22q 11.21成功杂交，显示桔红色的荧光信号(四甲基罗丹明)；如果ARSA基因探针与22q 13.31成功杂交，则出现绿色的荧光信号(细胞绿)。TUPLE1和ARSA基因互为内对照。在奥林巴斯BX51型荧光显微镜下对杂交信号进行观察，使用FISH VIDEOTEST 2.0软件分析。FISH信号的评价规则：有效标本为细胞膜完整且细胞杂交率80%，对每份样本随机分析100个处于分裂中期状态的细胞，22号染色体在细胞内呈绿色荧光 ......
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FISH诊断试剂盒(购自北京金菩嘉医疗科技有限公司)，胶原酶B、RNase A酶、胃蛋白酶(均购自美国Sigma公司)。国产长风恒温水浴箱、奥林巴斯BX51型荧光显微镜。
1.3 FISH检测
根据孕龄取羊水10 ml、脐血2 ml或绒毛3～4枝，采用FISH诊断试剂盒，对标本22号染色体TUPLE1基因的微缺失进行检测。GLP TUPLE1/GLP ARSA为待检测的基因，TUPLE1：22q 11和ARSA：22q 13为探针的位点，其荧光信号分别为桔红色和绿色，彼此互为内对照探针。严格按试剂盒说明进行操作，分别进行滴片、干燥、变性、杂交、后洗、染色和镜检等操作。如果TUPLEl探针与22q 11.21成功杂交，显示桔红色的荧光信号(四甲基罗丹明)；如果ARSA基因探针与22q 13.31成功杂交，则出现绿色的荧光信号(细胞绿)。TUPLE1和ARSA基因互为内对照。在奥林巴斯BX51型荧光显微镜下对杂交信号进行观察，使用FISH VIDEOTEST 2.0软件分析。FISH信号的评价规则：有效标本为细胞膜完整且细胞杂交率80%，对每份样本随机分析100个处于分裂中期状态的细胞，22号染色体在细胞内呈绿色荧光 ......
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