1.3.3侵袭实验 ①取无血清培养基，总量为200 μl，向其中加入50 μl Matrigel胶模仿基底膜，构建侵袭性检测系统，混匀，4℃操作，向上室各加入60 μl；放入37℃培养箱中，培养时间为4～5 h。②同迁移实验步骤。

    1.4 EMT相关标志物(E-cadherin，Vimentin)的检测

    为了明确TNF-α(10 ng/ml)对人肺鳞癌SK-MES-1细胞的标志物E-cadherin、Vimentin的影响，采用Western blot检测TNF-α(10 ng/ml)处理人肺鳞癌SK-MES-1细胞不同时间(0、1、3、5 h)时E-cadherin，Vimentin的表达情况。

    1.4.1实验组 TNF-α(10 ng/ml)处理组；对照组：TNF-α(-)未处理组。

    1.4.2细胞总蛋白的提取 ①将培养瓶中陈旧的培养基弃除后采用PBS缓冲液对细胞洗涤3次，并采用挂勺将细胞轻轻刮掉；②向其中加入PBS缓冲液吹打，剂量为1 ml，然后将细胞转移至1.5 ml预冷的Ep管中，离心分离，转速为12 000 r/min ......