1.2方法

    1.2.1细胞培养及分组 用低糖DEME完全培养基(含10%胎牛血清)培养细胞，待细胞贴壁60%～80%，改用无血清培养基进行同步培养，将细胞按照设计进行分组并加入不同浓度葡萄糖：正常对照组(5.5 mmol/L)、高糖组(30 mmol/L)、高糖+虫草素组(30 mmol/L，虫草素浓度10 μg/ml)，高糖+虫草素组使用虫草素进行预先干预2 h。

    1.2.2 qRT-PCR 待细胞培养足够时间，收集细胞，提取细胞的总RNA。然后对RNA进行OD值及浓度测定。取1 μg的总RNA按照试剂盒说明书的方法进行合成cDNA，然后再对逆转录产物进行扩增。采用primer 5.0软件设计目的基因引物序列，由北京华大基因公司合成，所得引物用DEPC水稀释后放于-20℃备用，各基因引物序列见表1。反应体系：SYBR 10 μl；Forward 0.16 μl；Reverse 0.16 μl；ddH2O 4.68 μl；cDNA 5 μl；反应条件及步骤：①预变性：采取95℃进行2 min；②变性：95℃的温度进行15 s；③退火：58℃进行30 s；④延伸：72℃延伸30 s；⑤循环：总共经过40个循环 ......