1 材料与方法

    1.1 试剂与仪器

    质粒小提试剂盒、DNA回收试剂盒购自天根生化科技有限公司；RNA提取试剂盒购自上海拜力生物科技有限公司；PCR相关试剂购自日本东洋纺公司；XholⅠ、EcoRⅠ、T4连接酶及Buffer购自宝生物工程大连有限公司；引物、非干扰型蛋白定量试剂盒、W-TMB显色试剂盒均由上海生工生物工程股份有限公司产品。PCR仪，离心机，均为德国Eppendorf公司产品。

    1.2 人源LAP截短型片段的扩增

    依据Gene Bank数据库中LAP的cDNA序列设计引物，为方便克隆在上下游引物的5′端加入XholⅠ和EcoRⅠ的酶切位点，上游引物5′-AGTGGACATCAACGGGTTC-3′，下游引物5′-CCAGTGTGTTATCCCTGCT-3′。按RNA提取试剂盒提人血总RNA，逆转录成cDNA，并以此为模板扩增基因片段。反应条件为：95℃预变性5 min，95℃变性30 s，55℃复性30 s，72℃延伸1 min，共35个循环，最后72℃延伸5 min。

    1.3 原核表达载体的构建

    扩增产物用1%的琼脂糖凝胶电泳分离后 ......