1.2 方法

    HSC-T6的培养与传代：使用 DMEM培养液(含100 U/ml青霉素，100 U/ml链霉素，10%胎牛血清)进行培养。设定培养温度37℃，CO2浓度5%，湿度饱和。予隔天进行1次换液。待细胞密度达80%～90%，以0.02% EDTA和0.25%胰蛋白酶分散细胞，按1∶4传代。根据加入NGF浓度的不同分为对照组(0 ng/ml NGF)及实验组(100 ng/ml NGF)。

    1.2.1 NGF对HSC-T6增殖的作用 取对数生长期细胞，细胞悬浮液浓度调至7×104/ml，接种于96孔板中，每孔200 μl，24 h后弃上清，加入各浓度NGF，两组各设4个复孔，培养24 h，而后将预配的 XTT比色液50 μl分别加入各孔，置于培养箱中再孵育4 h。使用酶标仪测定吸光值(OD值)，設定主波长570 nm，参考波长690 nm。

    1.2.2 NGF对HSC-T6凋亡的影响 取对数生长期细胞，细胞悬液浓度调至5×105/ml，接种于 T-25培养瓶中 ......