所有调查对象禁食12 h后，在次日晨抽取静脉血5 ml进行检测。具体方法如下。扩增MIF：提取基因组DNA，提取方法为酚氯仿抽提法。应用Primer 5.0软件设计引物：上游引物为5′-ACTAAGAAAGACCCGAGGC-3′，下游引物为5′-GGGGCACGTTGGTGTTTA-3′，目標片长度为366 bp，引物由上海英俊生物技术有限公司合成。使用PE公司生产的9700型PCR扩增仪扩增。扩增反应体系均为10 μl，PCR反应程序为34个循环，依次为预变性95℃、变性95℃、退火54℃和延伸72℃，时间分别为5 min、30 s、40 s和45 s。以上完成后，延伸10 min。用浓度为2%的琼脂糖凝胶电泳观察PCR产物[6-8];然后进行多态性分析。酶切体系包括5 μl的PCR扩增产物，5 U的Alu-I限制性内切酶等，酶切温度为37℃，酶切时间10 h。配置浓度为3.0%的琼脂糖凝胶，取8 μl酶切产物置于0.5×TBE溶液中电泳，电压90 V，电泳时间50 min。结束后，观察结果并拍照 ......