玻璃珠破碎法制备重组人CYP2C9酵母微粒体的条件优化(2)
酵母是最简单的真核生物之一,含有与哺乳动物细胞类似的细胞器[10-11]。通过组织匀浆和差速离心的方法[12],可以制备动物肝微粒体,同样,破碎酵母细胞也能够制备酵母微粒体[13]。利用重组人CYP450酵母微粒体对药物的代谢途径及代谢物进行筛选,可以消除酵母细胞本身(主要是细胞壁)[14-15]的干扰,使筛选结果更接近于人体。因此通过优化破碎方法制备最具活性的酵母微粒体,对微粒体反应体系灵敏度的提升具有重要意义。本研究以重组人CYP2C9酵母为研究对象,以CYP2C9典型底物双氯芬酸的代谢物的生成量及单位时间(h)内单位蛋白(mg/ml)所生成的代谢物量为指标,通过改变涡旋振荡次数和玻璃珠用量,探讨玻璃珠破碎法制备酵母微粒体的最优条件,现报道如下。
1材料与方法
1.1仪器与试剂
1.1.1仪器
LC-2010AHT高效液相色谱仪(日本岛津公司);涡旋振荡器XW-80A(海门市其林贝尔仪器制造有限公司);玻璃珠(美国Biospec公司 ......
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