混合血小板裂解液对人骨髓间充质干细胞原代培养、增殖和成骨分化的影响(2)
福建省血液中心采用富血小板血浆法制备的5袋浓缩血小板,超过储存时间而不能用于临床输注。浓缩血小板于-30℃冷冻24 h,37℃解冻,混合解冻后的浓缩血小板,并分装在50 ml离心管内,重复冻融过程一次,获得激活的pHPL,-30℃冷冻保存。使用时取分装的pHPL解冻,4℃ 4000 r/min离心15 min,去除碎裂的细胞组织,吸取上清,按体积比10%加入DMEM-LG培养液中备用。本研究获得福建省立医院医学伦理委员会批准,于2017年1月~2019年3月在福建省立医院中心实验室完成。1.2 hBMMSCs的分离和培养
选取临床上因为退变性疾病需要取髂骨植骨的患者,排除感染性和肿瘤性病变患者。术前获得患者及家属知情同意。术中抽取骨髓10~15 ml,通过密度梯度离心法分离hBMMSCs。细胞计数后,以1×107个/ml的密度等量接种于A组:10%FBS(PAN biotech,德国)+DMEM-LG培养液(Gibco ......
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