CCK-8法测定纤维蛋白胶对人脂肪干细胞的细胞毒性(2)
1.2研究方法1.2.1人脂肪干细胞的获取 选取2018年11月12日来我院进行成人吸脂术的某位28岁健康女性的术后废弃脂肪组织并从中得到人脂肪干细胞,本研究在医院医学伦理委员会和患者本人的授权下进行。将5 ml废弃的吸脂术后人体脂肪组织与Ⅰ型胶原酶溶液混合,溶液浓度与脂肪组织相同且浓度为1.0 mg/ml,简单摇匀后在37℃的水浴箱内部静置消化30 min,之后在离心机上按照1000 r/min的速度连续离心5 min来消去表面油脂和液体。利用FBS DMEM培养基来对细胞进行重悬,培养基的FBS浓度为10%,细胞浓度设置为(5×105~10×105)个/L,然后将细菌接种到规格为25 cm2的培养瓶中培养48 h再进行第一次液体更换,融合度达到80%后利用胰蛋白酶消化传代,传代数目为3代,完成后的干细胞留作后用。
1.2.2纤维蛋白胶浸提液的制備 纤维蛋白胶浸提液的萃取参照ISO 10993医疗用具的生物学评价准则来进行。将浓度分别为50 mg/ml和500 U/ml的纤维蛋白原溶液和凝血酶溶液按照等体积抽吸到双联注射器之中,并将其转注到6孔板上 ......
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