我院地中海贫血的基因型特点(2)
1资料与方法1.1一般资料
选取2016年1月~2018年6月在我院接受健康体检及产前检测的1600例受检人员,其中男451例,女1149例;年龄22~45岁,平均(30.59±2.65)岁。本研究已经医院医学伦理委员会批准。
纳入标准:受检人员自愿参与本研究并签署知情同意书,且愿意接受地中海贫血检测。排除标准:①存在缺铁性贫血疾病者;②存在急性出血现象者。
1.2方法
1.2.1检测仪器及试剂 检测仪器:ABI2720 PCR扩增仪(美国赛默飞世尔)、HB2012A 凯普核酸分子杂交仪(潮州凯普生物化学有限公司),试剂:α-地中海贫血基因检测试剂盒(广州凯普医药科技有限公司)、β-地中海贫血基因检测试剂盒(广州凯普医药科技有限公司)。
1.2.2检测方法 采用聚合酶链式反应法+膜杂交法。
1.2.3 DNA获取方法 采集受检人员2 ml静脉血,加入3倍体积溶血溶液,放在冰水浴内静置1 h,让红细胞溶血,实施离心干预,添加SE液(75 mmol/L氯化钠,25 mmol/L乙二胺四乙酸)适宜悬浮细胞,添加十二烷基硫酸钠(SDS)调节浓度至1%,将蛋白酶K加入,调节浓度到100 mg/L,在56℃水浴内静置7 h,采取等体积酚、酚/氯仿、氯仿/异戊醇各抽提1次,采取醋酸钠/无水乙醇处理得到DNA[7]。
1.2.4聚合酶链式反应法 采取DNA合成仪得到聚合酶链式反应引物及探针 ......
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