1.2.5 Western Blot检测 VPA可促进食管癌细胞凋亡来抑制食管癌细胞的生长。为了进一步探究VPA诱导的食管癌细胞凋亡的潜在的分子机制，选用Western Blot检测CyclinD1、p21、Survivin、Bcl-2家族和Caspase蛋白、C-PARP及PI3K/Akt和MAPK信号因子;在浓度为0.5 mmol/L VPA处理0、24、48 h后，经过RIPA裂解、蛋白的提取、蛋白溶度的测定、蛋白电泳、转膜、封闭后进行抗体孵育及显影。加入配置好的一抗室温下孵育2 h，TBST洗涤干净后，再加入辣根过氧化物酶标记的二抗，室温下孵育1 h，然后将多余的抗体弃去，加入显影液使其覆盖膜表面，最后进行显影。

    1.3统计学方法

    采用SPSS 15.0统计软件进行统计学处理，实时定量RT-PCR实验重复3次，每次做3个重复孔，计量资料用均数±标准差(x±s)表示，比较采用t检验，以P<0.05为差异有统计学意义。

    2结果

    2.1 MTT检测不同VPA浓度处理对细胞生长的抑制作用

    VPA能够抑制ECa-109细胞活力，且抑制作用具有浓度依赖性，随着浓度的增高，抑制效果明显增强，而且其IC50值为0.5 mmol/L，此浓度将作为后续试验VPA的浓度;进一步分析得出，相同时间及浓度下，药物作用时间越长，抑制率越高，生存能力越低。不同浓度VPA两两比较 ......