荧光PCR-探针熔解曲线法在缺失型α-地中海贫血快速诊断中的应用(3)
本研究发现PMCA也存在一些不足:当DNA浓度不合适或纯度不高时,容易造成曲线不平滑难以判读;当在探针覆盖区域的基因片段发生了未知基因突变时,可能出现异常峰,从而给判读造成一定困扰;其次目前还仅限于检测三种常见-α基因。本研究还发现,当判读-α3.7/--SEA或-α4.2/--SEA基因型时,由于--SEA/缺失了一对染色体中的一条染色体上全部的α1-和α2-基因,而-α3.7/或-α4.2/缺失发生在另一条染色体上部分的α1和α2-基因上,即-α3.7/缺失了α1-基因的5′端和α2-基因的3′端,-α4.2/缺失了α2-基因[1],--SEA/基因片段超出了PMCA检测体系中A-ROX或B-ROX探针检测区域,因此,显示B-FAM曲线图上有--SEA/缺失型峰和野生型峰,而在A-ROX或B-ROX曲线图上仅有-α3.7/或-α4.2/缺失型峰,无野生型峰,这需要特别注意,不要遗漏而错判为-α3.7/或-α4.2/纯合子,最好结合αT基因型、β-地贫基因型及血液学表型综合分析,以提高准确性。另外,本研究中PMCA检测到1例--SEA/αα合并未知突变基因,经DNA测序确认的单碱基突变,可能由于SNP多态性所致 ......
您现在查看是摘要页,全文长 4636 字符。