李 旭 叶 放 刘一秀 赵 宇 谢 鑫 杨立群 屠冠军

    1.沈阳医学院附属中心医院足踝外科，辽宁沈阳 110024；2.辽宁中医药大学机能实验中心，辽宁沈阳 110847；3.中国医科大学辽宁省计划生育研究所，辽宁沈阳 110031；4.中国医科大学第一临床医院骨科，辽宁沈阳 110001

    低氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α，HIF-1α)是诱导低氧基因和维持细胞氧内环境稳定的核心因子，可以调节能量代谢，血管形成，细胞凋亡，细胞分化，基质合成等相关基因的表达[1]。间盘组织处于一种低氧环境中，研究表明HIF-1α 在间盘中有表达[2]。Ha[3]等研究发现，在不同程度人突出椎间盘中，HIF-1α 的表达程度与细胞凋亡程度之间存在高度相关性，而其作用于髓核细胞凋亡的路径尚不完全清楚。本研究探讨HIF-1α 在间盘细胞凋亡中的作用，通过检测HIF-1α 诱导凋亡途径中凋亡相关蛋白的表达情况，揭示HIF-1α 在SD 大鼠髓核细胞线粒体凋亡路径中所起的作用。

    1 材料与方法

    1.1 实验材料与仪器

    选择刚断奶的30日龄SD 大鼠，一共20 只，清洁级，由中国医科大学实验动物中心提供，实验动物合格证号：SCXK(辽)2013-0001，检疫合格备用，经过相关动物伦理委员会审核同意，选择光线充足、通风良好的实验环境，适应性喂养1 周后备用，其中10 只为雌性，10 只为雄性，体重为50～60 g。

    SABC 免疫组化试剂盒(博士德公司，批号：QD82102)，兔抗鼠Ⅱ型胶原一抗(Neomakers 公司，批号：SC17852)，山羊抗兔抗体(IgG)(北京百奥莱博科技有限公司，批号：F030212)，单克隆兔抗鼠HIF-1α一抗(Santa Cruz 公司)，CAY10585(cayman 公司，批号：10012682-5)，CoCl2(上海迈瑞尔化学技术有限公司，批号：20080890)，CO2培养箱(德国Seracell)，三气低氧培养箱(型号：Heraeus cell 150)，倒置相差显微镜(奥特光学器材厂)，正置光学显微照相系统(奥特光学器材厂，型号：Olympus BX51)，电泳仪(美国IKA 公司)，转印仪(美国IKA 公司)，722 分光光度计(美国IKA 公司)，流式细胞仪(Calibar BD USA)。

    1.2 髓核细胞原代培养及纯化

    在无菌条件下取30日龄SD 大鼠腰椎髓核组织 ......