马世琦 邓秀玲 吴亚男 韩晶晶 赵 阳 乔一芸 王海生▲

    1.内蒙古自治区中医医院门诊办公室，内蒙古呼和浩特 010020；2.内蒙古医科大学基础医学院生物化学与分子生物学系，内蒙古呼和浩特 010110；3.内蒙古医科大学基础医学院医学实验中心，内蒙古呼和浩特 010110

    肝细胞癌(hepatocellular carcinoma，HCC)是最常见的肝癌组织学亚型，占全世界原发性肝癌的80%以上[1]。 在全球范围内，HCC 是与癌症相关死亡的第四大最常见原因，其五年生存率仅为18%，是仅次于胰腺癌的第二大致命肿瘤[2-3]。 由于大部分HCC 患者发现时已处于进展期，而全身化疗的中位生存时间也不到1 年，治疗效果不理想[4]。阿拉嘎斑布是我国的传统蒙药，是芫菁科昆虫的干燥虫体，其具有破血逐瘀、散结消癥、滋补肾阳、调理体素、增强抵抗力等功效[5]，其有效药物成分主要为斑蝥素(cantharidin，CTD)，分子式C10H12O4，分子量196.2 D。 有关CTD 的提取方法不尽相同，主要有震荡静置提取法、超声波震荡提取法、冷浸提取法、碱水提取法、热回流提取法等[6-9]。有文献报道，芫菁虫体不同部位的CTD 产率有差别，其中产率最高的部位为虫体的腹部，并且发现干燥虫体较活体虫体能获得更多的CTD[10]。CTD 对多种人类恶性肿瘤均表现出显著的抗癌活性，如对喉癌、肾癌、肺癌、肝癌、胃癌、皮肤癌等多种肿瘤的生长表现出明显的抑制作用[11-14]。但是，CTD 对肝癌抑制作用的具体分子机制目前仍不完全清楚。本研究选用蒙药阿拉嘎斑布虫体作为研究药物，使用课题组前期通过混合法提取的CTD 作为实验用药，研究其对HepG2 细胞的影响，并通过RNA 测序， 尝试从分子水平及基因表达谱的角度对CTD 治疗肝癌的分子机制进行研究， 为蒙药用于肝癌的治疗提供新的线索和依据。

    1 材料与方法

    1.1 细胞与主要试剂

    HepG2 细胞株购自武汉普诺赛生物科技有限公司；阿拉嘎斑布干燥虫体购自内蒙古自治区中医医院；胎牛血清购自美国GIBCO 公司；CTD 标准品及PI细胞周期检测试剂盒购自西格玛奥德里奇上海贸易有限公司；MTT 试剂盒购自北京鼎国昌盛生物技术有限责任公司；Caspase-GloR3/7 检测试剂盒购自普洛麦格北京生物技术有限公司；RNAiso Plus Total RNA 提取试剂盒等 ......