万珊珊 孙晓冬 闫 磊

    牡丹江医学院组胚教研室，黑龙江牡丹江 157011

    脑胶质瘤是中枢神经系统发病率最高的恶性肿瘤，具有发病率高、对放疗和化疗抵抗并容易复发等特点[1-2]。脑胶质瘤是由大脑和脊髓胶质细胞恶变产生的，也是人脑原发性肿瘤中最常见的类型，包括星形细胞瘤，少突胶质细胞瘤和室管膜瘤。根据世界卫生组织标准，胶质瘤分为4 个等级，包括毛细胞型星形细胞瘤(Ⅰ级)、弥散性星形细胞瘤(Ⅱ级)、间变性星形细胞瘤(Ⅲ级)以及多形性胶质母细胞瘤(Ⅳ级)[3]。中药治疗作为新的治疗方法越来越被关注。甘草查尔酮A 是从甘草根中提取出来的黄酮类化合物，具有多种药理学活性，包括抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗菌、抗寄生虫及成骨活性、免疫调节、解痉挛等，目前最受关注的是甘草查尔酮A 的抗肿瘤活性[4]。本实验选取人脑胶质瘤U251 细胞为实验对象，探讨甘草查尔酮A对人脑胶质瘤U251 细胞增殖和凋亡的影响。

    1 对象与方法

    1.1 细胞系

    人脑胶质瘤细胞系U251，购自美国ATCC 公司。

    1.2 主要仪器与试剂

    5417R 台式高速离心机(德国Ep-pendorf 生命科学公司)；JYH27020 电泳仪(美国Bio-Rad 公司)；ELX800 酶标仪(美国Bio-Tek 仪器公司)。

    甘草查尔酮A，纯度>98%，购自成都瑞芬思生物科技有限公司；MTT 试剂购自美国Sigma 公司；胎牛血清购自美国invitrogen 公司。

    1.3 实验分组及处理

    复苏人脑胶质瘤细胞系U251，将人脑胶质瘤U251细胞分为四组(n=20)，对照组予以等量0.9% NaCl 处理，甘草查尔酮A 低剂量组予以15 μmol/L 甘草查尔酮A处理，甘草查尔酮A 中剂量组予以30 μmol/L 甘草查尔酮A 处理，甘草查尔酮A 高剂量组予以45 μmol/L 甘草查尔酮A 处理，干预48 h。

    1.4 观察指标及检测方法

    1.4.1 细胞培养 将人脑胶质瘤U251 细胞培养至含10%胎牛血清、含100 U/L 青链霉素的DMEM 培养基中，置于5% CO2、37℃恒温培养箱中，每隔1～2 d 用胰蛋白酶传代1 次。

    1.4.2 细胞增殖实验 将细胞按20 000 个/ml 的密度接种于96 孔培养板上 ......