miR-24对胃癌细胞株BGC-803及SGC-7901凋亡和增殖的影响(2)
参见附件。
1.3 细胞增殖分析 使用CCK-8试剂盒(Dojindo)对转染后的细胞增殖情况进行分析。细胞在24孔板中按每孔约5×104个细胞进行铺板，使用生长培养基培养。然后12孔中转染20 nM的miR-24-ASO，同时另外12孔中转染20 mM的NC-ASO作为对照。分别在转染1、2、3、4 d后加入10 μL CCK-8检测试剂，反应2 h候吸取上清液，在分光光度计下检测450 nm下的吸收光，每次检测取三个复孔。使用sigmaplot软件作出转染后细胞的增殖曲线。
1.4 细胞凋亡流式细胞分析 使用流式细胞Annexin-V-FITC/PI双染凋亡检测试剂盒(Sigma)，对转染后的胃癌细胞进行凋亡分析。细胞转染miR-24-ASO或NC-ASO寡核苷酸48 h后收集细胞，使用垂直离心机以4000 r/min转速离心5 min收集细胞。使用PBS缓冲液洗两遍后加入300 μL的结合缓冲液重悬细胞，然后加入2 μL的Annexin V-FITC和4 μL的PI染料进行染色。染色10 min后进行流失细胞仪进行细胞凋亡分析。使用WinMDI软件分析转染后细胞凋亡的变化。
2 结果
2.1 抑制miR-24的表达可以诱导胃癌细胞BGC-803、SGC-7901发生凋亡 使用INTERFERin转染试剂向胃癌细胞株BGC-803和SGC-7901分别转染20 mM锁核苷酸标记的miR-24反义核酸miR-24-ASO，以抑制内源性miR-24的表达水平，同时转染20 mM的NC-ASO作为参照。在转染48 h之后，分别使用倒置显微镜观察细胞的生长状况。结果发现，使用miR-24-ASO转染的细胞相对于转染阴性内参细胞的凋亡水平在BGC-803和SGC-7901两个胃癌细胞株中都发生了明显了增加(图1)。进一步验证抑制miR-24的表达对胃癌细胞凋亡情况的影响，笔者收集了培养基中的细胞并用胰酶消化贴壁的细胞，使用PBS缓冲液洗涤后 ......
1.3 细胞增殖分析 使用CCK-8试剂盒(Dojindo)对转染后的细胞增殖情况进行分析。细胞在24孔板中按每孔约5×104个细胞进行铺板，使用生长培养基培养。然后12孔中转染20 nM的miR-24-ASO，同时另外12孔中转染20 mM的NC-ASO作为对照。分别在转染1、2、3、4 d后加入10 μL CCK-8检测试剂，反应2 h候吸取上清液，在分光光度计下检测450 nm下的吸收光，每次检测取三个复孔。使用sigmaplot软件作出转染后细胞的增殖曲线。
1.4 细胞凋亡流式细胞分析 使用流式细胞Annexin-V-FITC/PI双染凋亡检测试剂盒(Sigma)，对转染后的胃癌细胞进行凋亡分析。细胞转染miR-24-ASO或NC-ASO寡核苷酸48 h后收集细胞，使用垂直离心机以4000 r/min转速离心5 min收集细胞。使用PBS缓冲液洗两遍后加入300 μL的结合缓冲液重悬细胞，然后加入2 μL的Annexin V-FITC和4 μL的PI染料进行染色。染色10 min后进行流失细胞仪进行细胞凋亡分析。使用WinMDI软件分析转染后细胞凋亡的变化。
2 结果
2.1 抑制miR-24的表达可以诱导胃癌细胞BGC-803、SGC-7901发生凋亡 使用INTERFERin转染试剂向胃癌细胞株BGC-803和SGC-7901分别转染20 mM锁核苷酸标记的miR-24反义核酸miR-24-ASO，以抑制内源性miR-24的表达水平，同时转染20 mM的NC-ASO作为参照。在转染48 h之后，分别使用倒置显微镜观察细胞的生长状况。结果发现，使用miR-24-ASO转染的细胞相对于转染阴性内参细胞的凋亡水平在BGC-803和SGC-7901两个胃癌细胞株中都发生了明显了增加(图1)。进一步验证抑制miR-24的表达对胃癌细胞凋亡情况的影响，笔者收集了培养基中的细胞并用胰酶消化贴壁的细胞，使用PBS缓冲液洗涤后 ......
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