Twist与RECK在非小细胞肺癌中的表达及其对预后的影响(2)
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1 材料和方法
1.1 材料 选择2008年1月～2009年6月潍坊市人民医院胸外科住院治疗的NSCLC患者肿瘤标本60例作为实验组，另取60例距离肿瘤5 cm以上的正常肺组织作为对照组。其中男45例，女15例，年龄30～76岁，中位年龄56岁，术前均未接受放化疗。按照WHO肺癌分型标准及UICC(2009年)新的国际肺癌分期标准进行分型、分期，其中腺癌24例，鳞癌36例；Ⅰ期6例，Ⅱ期34例，Ⅲ期12例，Ⅳ期8例。所应用试验标本采用10%的福尔马林固定，常规石蜡包埋，4 μm厚连续切片。
1.2 病例随访 以电话、信件等形式对60例肺癌手术患者进行随访，随访资料完整，无瘤生存期的计算从手术日期到随访截止日期(2011年6月)，或出现肿瘤复发、转移、死亡的日期为止。到随访截止日有2例失访，有40例存活(其中4例出现复发)，18例死亡(其中16例因肿瘤复发死亡，2例因意外死亡)。
1.3 免疫组化方法检测Twist及RECK的表达，采用SP法，Twist和RECK兔抗人单克隆抗体均购自北京博奥森公司，Twist单克隆抗体(1∶150稀释)，RECK单克隆抗体(1∶100稀释)，染色步骤按说明书进行。
1.4 结果判定 RECK、Twist的阳性染色模式均为细胞浆着色，呈浅黄色至棕黄色颗粒。选具有代表性的10个高倍视野进行观察计数，每个视野计数100个肿瘤细胞。在肿瘤细胞膜和(或)细胞质有黄棕色或玫瑰红色颗粒沉着为RECK及Twist阳性染色。根据染色程度和染色细胞百分率进行评分，基本不着色为0分，着色淡为1分，着色适中为2分，着色深为3分；着色细胞占计数细胞百分率≤5%为0分，6%～25%为1分，26%～50%为2分，>50%为3分。将每张切片平均着色程度得分与平均着色细胞百分率得分各自相乘为其最后得分：1分为阴性(-)，2～3分为(+)，4～6分为(++)，>6分为(+++)。弱阳性表达指(+)，强阳性表达指≥(++)。
1.5 统计学处理 应用SPSS 17.0统计软件进行统计学分析，计数资料采用率表示，不同组间比较行χ2检验，生存率的组间比较采用Kaplan-Meier生存曲线法及Log-rank检验，以P<0 ......
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