夹心ELISA检测血清结缔组织生长因子及其初步临床应用(2)
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1.2.2 ELISA实验的重复性、稳定性及特异性 对混合血清样本(健康对照)重复检测15次(每次测定2复孔，取其平均值)；反复进行6次重复实验，分别计算批内及批间变异系数(CV)。同时将制备好的试剂盒于37 ℃温箱放置4 d，与4 ℃保存的试剂盒平行检测健康对照血清，每份同时检测2次，以测定本检测方法的稳定性。
1.2.3 血清CTGF含量的检测 用包被液将稀释成一定浓度的CTGF mAb分别滴加在96孔聚苯乙烯板微孔内，100 μl/孔，4 ℃过夜，次日用0.5 ml/LT ween-20 PBS(PBST)洗板3次，每次3 min；拍干后加封闭液(含150 ml/L小牛血清的PBS)，200 μl/孔，37 ℃，1 h，4 ℃过夜。次日弃之，PBST洗涤3次，每次3 min。加入稀释的CTGF标准品：1 ng/ml、2 ng/ml、5 ng/ml、10 ng/ml、20 ng/ml、50 ng/ml，以及待测样品(1∶10稀释)50 μl/孔，并设空白对照，37 ℃水浴1 h，PBST洗板5次；加辣根过氧化物酶标记的CTGF多克隆抗体，37 ℃水浴30 min，PBST洗板5次，彻底拍干后加入TMB显色剂，37 ℃，15 min，加2 mol/L H2SO4终止液终止反应。酶标仪450 nm处测量吸光度A值。
1.3 试剂盒对比实验 随机取20份临床肝炎血清标本，用本法与美国加利福尼亚州Rapidbio Lab实验室生产的CTGF定量ELISA试剂盒进行对比实验。
1.4 统计学处理 应用SPSS 11.5软件包进行统计学处理，检测结果以均数±标准差(x±s)表示，两组间计量资料比较用t检验，计数资料比较用χ2检验。以P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 实验影响因素 经方阵滴定确定，抗CTGF mAb最终包被的稀释比例为1∶200 ......
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