中间层在成釉细胞分泌期的矿化相关因子表达研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
1.3 矿化相关信号分子在小鼠牙釉质形成初期表达的组织学定位与观察 采用免疫组化PV二步法对TNSALP、E-cad、OC、BSP、OPN、DMP-1、FM、BGN和DCN的表达进行组织学定位。取出生后7 d和13 d小鼠磨牙的标本，二甲苯脱蜡，梯度水化至水，3%过氧化氢室温孵育5 min，以阻断内源性过氧化物酶，复合消化液消化5 min，蒸馏水洗，血清封闭，室温孵育20 min，不洗，滴加一抗(FM、BGN和DCN为1:2000，其他为1：100稀释)37 ℃孵育1 h，PBS漂洗，羊抗鼠IgG抗体-HRP多聚体，37 ℃孵育20 min，PBS漂洗，DAB溶液显色，蒸馏水冲洗，苏木素复染，中性树胶封片，显微镜下观察并照相。阴性对照片用PBS分别代替一抗或二抗，以成骨肉瘤组织作阳性对照。
1.4 结果判定标准 根据本研究实验结果结合文献设定标准如下：(1)阴性表达(-)：细胞质内无淡黄色及棕黄色颗粒，苏木素复染后呈蓝色者。(2)弱阳性表达(+)：细胞质内淡黄色，或阳性着色低于该组织结构的10%。(3)阳性表达(++)细胞质内淡黄或棕黄色颗粒占该组织结构的10%～60%，染色清晰。(4)强阳性表达(+++)：细胞质内淡黄或棕黄色颗粒占该组织结构的60%以上，染色强。
2 结果
2.1 釉质分泌期的中间层组织学观察 中间层的发育过程自成釉器分化为内釉上皮、中间层、星网状层和外釉上皮四层结构开始，伴随内釉上皮分化为成釉细胞和成釉细胞的分泌过程，到釉质分泌完成后逐渐消失。从开始的2～3层细胞结构到单细胞结构；从细胞排列紧密，与周围组织界线清楚到细胞排列疏松，与周围组织界线逐渐不清，不易辨认。具体见图1。
图中A：出生后1 d的小鼠牙胚成釉器已分化为内釉上皮、中间层、星网状层和外釉上皮四层结构。可见内釉上皮呈柱状或高柱状，釉牙本质界限清楚，中间层为2～3层细胞组成的条带结构，胞核明显，呈椭圆形。其外周为疏松的星网状层。B：出生后3 d，内釉上皮分化为高柱状的成釉细胞，可见釉质和牙本质分泌，紧邻成釉细胞的中间层结构清楚，由1～2层细胞组成，细胞之间连接紧密，星网状层结构开始萎缩 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。